清晰明了的外泌体纯化方法比较
发布时间：2024-04-26 点击数：69
外泌体的研究日益活跃并令人瞩目。外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30-150 nm 的具有脂质双层膜的微小膜泡。它广泛存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。
但是，由于外泌体的纳米尺寸，同其它类型的胞外囊泡在理化和生化特征上部分重叠，以及自身在大小、组成和功能方面存在异质性，其分离纯化也面临挑战。为了更清晰的让大家了解目前主流的几种外泌体纯化分离方法的优缺点，参考文献及网络信息给大家做了如下总结，供大家参考。
近年来，研究人员根据外泌体理化性质研发了多种分离纯化方法常用的有:
- 超速离心/差速离心（UC法）
- 密度梯度超速离心法
- 尺寸排阻色谱（SFC）
- 超滤（UF）
- 多聚物沉淀法（PEG）
- 免疫亲和法
- 磷酯酰丝氨酸（PS）
- 微流控等
以上不同方法的优缺点及应用范围见下表
纯化方法 | 设备及耗材需求 | 时长 | 优点 | 缺点 | 推荐用途 |
超速离心/差速离心（UC） | 超速离心机 | ＞4h | 操作规范，难度低，适用性广，金标准 | 耗时长，回收率低，重复性差，纯度低 | 外泌体功能学实验 |
密度梯度离心 | 超速离心机，分离介质 | ＞16h | 外泌体纯度高 | 耗时长，操作繁琐，回收率低 | 组学研究 |
尺寸排阻色谱（SEC） | 柱子、填料、自动层析系统 | 30 min | 简单、经济、大规模、外泌体纯度高，结构和功能最大限度得以保留 | 样本经过流动相稀释，结合超滤浓缩可解决 | 组学、标志物研究的首选 |
超滤（UF） | 超滤管/离心机套装（DEF）或恒流泵/膜包套装（TFF） | ＜4 h | 简单、经济、大规模、回收率高，常与其他方法复合使用 | DEF滤膜容易堵塞，影响通量（可用TFF实现高通量） | 需要对样本浓缩并与其他方法复合使用的 |
聚合物沉淀法 | 离心机、PEG | 0.3-12 h | 操作简单，设备简单、耗时短，可处理大样本量，易于与现有的分离方法结合 | 纯度极低，易受到脂蛋白或病毒颗粒的污染，影响分析 | 不需要进行组学研究的极低纯度要求研究者 |
免疫亲和法 | 抗体、固定抗体的载体（例如磁性颗粒、微流体装置） | 4-20 h | 特异性，纯度高，能分离出特定的外泌体亚类 | 耗时，分离成本高，对试剂和储存条件要求高，异质性可能导致低纯度或产量 | 需要分离特定外泌体亚类且需求高纯度的研究者 |
PS亲和法 | 磁珠、试剂 | / | 使用方便，纯度高，形态完整，耗时短，无仪器需求 | 不适合大样本分离，分离的外泌体可能含其他膜样杂质（可用wakoEV大规模分离纯化柱） | 适用于多数研究场景，适合小体积、不依赖设备的研究者 |
微流控 | 微流控平台 | / | 高效方便，纯度高，样本污染风险小，可实现自动化诊断 | 门槛较高，只适合小样本分离 | 仅需少量样本、用于医学诊断的研究者 |
*WAKO新推出的MassivEV™ EV纯化分离柱 PS/MassivEV™ EV纯化缓冲液套装可解决以上PS亲和捕获法的不足，可满足大规模纯化外泌体等细胞外囊泡的分离。
PS亲和法可实现完整EV的高度纯化（引用FUJIFILM）
综上对比细胞外囊泡的纯化方法，PS亲和纯化在EV回收率，纯度，囊泡完整性等方面都有一定优势。最近WAKO重磅推出的MassivEV™ EV纯化分离柱PS/MassivEV™ EV纯化缓冲液套装可完美解决PS亲和捕获法不适用大体积的缺点，可满足大规模纯化外泌体等细胞外囊泡的分离。详情见——你需要的大规模纯化外泌体方法来了
产品优势
- 使用方便，纯度高，形态完整，耗时短，无仪器需求
- 可从大规格（10 mL至1L级别规格）细胞培养上清中高效分离和纯化高纯度EV
- 只需一个蠕动泵，无需切向流过滤（TFF）系统等昂贵设备
- 高性价比（处理同一样品时，可重复使用分离柱5次）
产品概要
产品组成：MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS
MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装
产品列表
适用于10 mL至1L级细胞培养上清
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品应用 |
131-19491 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™;细胞外囊泡（EV）纯化分离柱PS | 1mL 5mL | 基因研究 |
295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装 ① EV Binding Enhancer ② Washing Buffer ③ EV Elution Buffer ④ EV-Stabilizer A ⑤ EV-Stabilizer B ⑥ Storage Buffer | 1mL×10次用 (5mL×2次用) | 基因研究 |
以上MassivEV™ EV Purification Column PS、MassivEV™ Purification Buffer Set请配合一同使用
相关产品
适用于从10 mL以下的细胞培养上清和体液样品中分离和纯化EV
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品应用 |
294-84101 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™外泌体提取试剂盒PS Ver.2 | 2 tests 10 tests | 基因研究 |
外泌体ELISA检测（更多产品点击）
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品应用 |
298-80601 | PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Streptavidin HRP） PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（链霉亲和素HRP） | 96T | 基因研究 |
间充质干细胞（MSC）增殖用培养基
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品应用 |
132-19345 | MSCulture™High Growth Basal Medium MSCulture™ High Growth基础培养基 | 500 mL | 细胞培养 |
133-19331 | MSCulture™ High Growth Supplement MSCulture™High Growth添加剂 | 5 mL | 细胞培养 |
以上MSCulture™ High Growth基础培养基、MSCulture™ High Growth添加剂请配合一同使用
间充质干细胞（MSC）EV生产用培养基
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品应用 |
053-09451 | Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分 | 95mL | 细胞培养 |
298-84001 | EV-Up™MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分 | 5 mL（100 mL用） | 细胞培养 |
以上EV-Up™基础培养基、EV-Up™添加剂请配合一同使用
※ 仅供实验研究用，不可用于临床诊断。
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