GenomONE(R) 仙台病毒包膜细胞融合试剂 - GenomONE(R) -CF EX

GenomONE^®-CF EX 含有仙台病毒包膜和专用缓冲液，可促使细胞融合。

适用于贴壁/悬浮状态的所有细胞，仅需 30 min，即可制备融合细胞和杂交瘤。

HVJ 包膜（HVJ-E）是完全灭活和纯化仙台病毒（HVJ*），即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合，通过Ｆ蛋白的作用，引起细胞膜融合。在 HVJ-E 中，仙台病毒的基因组 RNA 已经完全失活，在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备，它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ：日本仙台病毒

在低温（0 - 8℃)条件下，每一个细胞与数百个以上的 HVJ - E 接触，HVJ - E 与细胞膜上的唾液酸受体结合，通过细胞表面吸附（步骤１），细胞通过 HVJ-E 相互连接（步骤２），形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/HVJ-E 的复合物加热到 37℃ 时，细胞膜干扰就会进一步扩大，细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的，随后会立即返回到正常结构，但是在这个期间，细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤３）。

荧光标记的红（* 1）细胞和绿色荧光标记（* 2）细胞（每1.0×10⁵个）在融合缓冲液 50 μL 混合后，加入 HVJ-E 冰敷５分钟，随后 37℃ 下反应 15 分钟后，融合细胞（黄色）进行了观察。

荧光标记的（* 1）中的红，附着的细胞在 12 孔平板，绿色荧光标记（* 2）中，添加预先准备的 HVJ-E，来处理漂浮细胞１×10⁵个的悬浮液（融合缓冲污染），并在室温下离心（1000转），每个板５分钟。随后孵育37℃15分钟后，更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察３个小时后的融合细胞（黄色）。

红色荧光标志(* 1）的 ratMSC（骨髓由来老鼠间叶系细胞）和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞２×10⁵个融合缓冲液 50 μL 中混合后，添加 HVJ-E，冰浴５分钟，然后 37℃ 孵育反应15分钟，观察融合细胞（黄色）。１-２日培养后，观察到粘着的融合细胞。在 PEG 法中融合紧接之后细胞毒性强烈，融合细胞的数量很少。