去除融合蛋白标签的首选蛋白酶——看这里

大家好，我是蛋白工具酶家族的新成员，我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做个自我介绍：

重组TEV蛋白酶（rTEV Protease）经过基因工程改造，在大肠杆菌中重组表达，带His标签(6X His tag)，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶，较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强，具有高活性和高特异性的特点。

严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在广泛pH（6.0-8.5）和温度（4-30℃）内进行酶切，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性。

用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His，酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV，以达到纯化目的蛋白的目的。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

1.按如上表格配制反应体系。
 2.混匀后在30℃条件下温育，分别在1h、2h、4h、6h后取样，置于单独的EP管中。
 3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
 4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定酶切效果，调整所需的合适酶量和反应时间。
 5.如果目的蛋白在30℃不稳定，可以于4℃反应过夜(16小时左右)。

低温运输，-20℃保存，有效期≥2年。

1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；

2）Zn2+浓度（>5 mM）对rTEV活性有抑制作用；

3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。

Q：该产品有何优点？
 A：重组型TEV 蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅有天然 TEV 酶活性，同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题，在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。

Q：该产品可用于什么实验？、
 A：rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性。

Q：该产品的最适酶切时间和温度是多少？
 A：16-30℃下反应 3-3.5h 最好。

Seebio® TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒（荧光法）