前列腺特异性抗原（tPSA）-磁微粒化学发光法（AE/AP） /荧光免疫层析解决方案

1.项目背景    

1.1 临床介绍-摘自《前列腺癌诊疗指南2022年版》    

1.1.1背景简介    

前列腺癌是泌尿男性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。2021年2月WHO国际癌症研究机构发表的全球癌症统计报告2020年版显示，2020年全球新发前列腺癌1414259例，占全身恶性肿瘤的7.3%，发病率仅次于乳腺癌和肺癌，位于第3位；前列腺癌死亡病例375304例，占全身恶性肿瘤的3.8%，死亡率位居第8位。2019年1月国家癌症中心公布了2015年我国恶性肿瘤最新发病率和死亡率情况，其中前列腺癌新发病例7.2万，发病率为10.23/10万，位居男性恶性肿瘤的第6位；死亡3.1万，死亡率为4.36/10万，位居男性恶性肿瘤的第10位。

从世界范围看，前列腺癌发病率有明显的地理和种族差异，澳大利亚/新西兰、北美及欧洲地区发病率高，发病率在85/10万以上；亚洲地区发病率最低，发病率在4.5/10万至10.5/10万。我国前列腺癌的发病率虽远低于欧美国家，但近年来呈逐年上升趋势。我国前列腺癌发病率增加的主要原因可能是：人口老龄化、人民生活方式改变以及前列腺特异抗原（prostate-specific antigen,PSA）等前列腺癌筛查方式的普及应用。我国前列腺癌的另一特点是城市的发病率显著高于农村，2015年我国城市前列腺癌的发病率为13.44/10万，而农村为6.17/10万。

1.1.2临床意义    

前列腺特异性抗原（PSA）是一种男性在体检中常见的肿瘤标记物。它是一种由前列腺上皮细胞分泌的一种蛋白酶，存在于前列腺上皮组织和精液中。健康男性血液中PSA含量极低。但如果当前列腺组织受到外力刺激，结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，血液中PSA含量就会升高。PSA具有较强的器官特异性，随着人们生活水平及医疗水平的提高，PSA已被广泛用于早期前列腺癌的筛查及前列腺癌的辅助诊疗。临床上常用的有总前列腺特异性抗原（T-PSA）,包括血清中游离前列腺特异性抗原（F-PSA）及F-PSA/T-PSA比值。

1.2指南推荐-摘自《中国前列腺癌筛查与早诊早治指南2022年版》    

问题７：前列腺癌筛查频率    

推荐意见：已接受筛查且预期寿命10年以上的男性，推荐每2年检测1次血清PSA。

（强推荐，证据分级为中级）

问题８：前列腺癌筛查停止时间    

推荐意见8.1：推荐PSA检测水平＜1.0ng/mL的60岁及以上男性停止筛查。

推荐意见8.2：推荐年龄≥75岁的男性结合个人健康状况选择是否停止筛查。

推荐意见8.3：推荐预期寿命＜10年者停止筛查。

（强推荐，证据分级为中级）

问题14：前列腺癌筛查结果管理    

推荐意见14.1：两次血清PSA＞4.0ng/mL，排除影响PSA检测水平其他因素干扰后，推荐由泌尿专科医师引导进一步临床检查和干预。

推荐意见14.2：血清PSA≤4.0ng/mL时，建议定期（每2年）监测1次。

2.性能表现    

针对tPSA的检测，西宝生物推出2株PSA抗体及1款PSA抗原。    

具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。

2.1化学发光（AE）平台    

组合1：重组人前列腺特异抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773B）包被羧基磁珠+小鼠抗人前列腺特异性抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773A）标记吖啶酯；    

线性范围：0.02ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.02ng/mL；HOOK：20000ng/mL。

 

2.2化学发光（AP）平台    

组合2：重组人前列腺特异抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773B）包被羧基磁珠+小鼠抗人前列腺特异性抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773A）标记碱性磷酸酶；    

线性范围：0.02ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.02ng/mL；HOOK：20000ng/mL。

组合3：小鼠抗人前列腺特异性抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773A）标记荧光微球+重组人前列腺特异抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773B）划膜；    

线性范围：0.1ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.1ng/mL；HOOK：10000ng/mL。

 

2.4各组分稳定性评估    

2.4.1采用PSA磁珠稀释液（化学发光）（货号：DCD0566A）将磁珠包被的PSA抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.2采用PSA吖啶酯稀释液（化学发光）（货号：DCD0566B）将吖啶酯标记的PSA抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.3采用PSA碱性磷酸酶稀释液（化学发光）（货号：DCD0566C）将碱性磷酸酶标记的PSA抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.4采用PSA抗原稀释液（化学发光）（货号：DCD0566D）将PSA抗原配制成梯度进行37℃热稳定性实验；

如表1所示：

a.磁珠包被PSA抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明磁珠包被PSA抗体工作液热稳定性良好；

b.吖啶酯标记PSA抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±15%以内，表明吖啶酯标记PSA抗体工作液热稳定性良好；

c.碱性磷酸酶标记PSA抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明碱性磷酸酶标记PSA抗体工作液热稳定性良好；

d.PSA抗原梯度单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明PSA抗原梯度热稳定性良好。

表1 PSA各组分工作液及抗原热稳定性7天数据    

3.临床相关性    

3.1化学发光（AE）平台：    

西宝生物发光（AE）平台PSA抗体配对组合1与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的低值（≤15ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性较好；与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜120ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好。

 

 

3.2化学发光（AP）平台：    

西宝生物发光（AP）平台PSA抗体配对组合2与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的低值（≤15ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性较好；与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜120ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好。

 

 

3.3荧光免疫层析平台：    

西宝生物荧光免疫层析平台PSA抗体配对组合3与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的低值（≤15ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性较好；与罗氏诊断的PSA试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜100ng/mL）临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好。

 

 

4.测试方案    

4.1化学发光（AE）平台    

PSA抗体配对组合1    

待测抗原:人前列腺特异性抗原（PSA）（货号：EKY0031G）；    

样本:样品加样量10ul；

试剂1：重组人前列腺特异抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：小鼠抗人前列腺特异性抗原（PSA）抗体标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul 试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。    

4.2化学发光（AP）平台    

PSA抗体配对组合2：    

待测抗原:人前列腺特异性抗原（PSA）（货号：EKY0031G）；    

样本:样品加样量10ul；

试剂1：重组人前列腺特异抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：小鼠抗人前列腺特异性抗原（PSA）抗体（货号：EKN0773A）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。    

4.3荧光免疫层析平台    

PSA抗体配对组合3    

待测抗原:人前列腺特异性抗原（PSA）（货号：EKY0031G）；    

反应条件：10ul样品+100ul稀释液混匀，上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。    

5.产品信息