血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）- 磁微粒化学发光法
发布时间：2025-05-13 点击数：4
1. 项目背景
凝血酶的生成是凝血途径的核心，它催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白形成血栓。由于它在体内的半衰期极短，只有几秒钟，因此测定困难。血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）在纤维蛋白聚合物形成过程中产生，是凝血酶生成后与抗凝血酶1:1结合形成的复合物，在血浆的半衰期约3-15分钟，可间接反映凝血酶的生成量，是凝血系统启动的标志，可直接、灵敏地反映凝血系统的活化程度，并进一步早期预测血栓的形成和再栓的复发。同时，TAT也是抗凝治疗的敏感指标，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢进，机体处于高凝状态。
日本血栓止血学会的学术标准化委员会《纤溶优势型DIC的病态诊断指南（2006年）》中，将“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作为诊断必要条件。即使是血小板计数＜120×109μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性减少），如TAT＜7ng/mL，提示发生DIC风险较低。TAT对于感染性疾病患者的DIC趋势预测，是一种阴性预测值较高的标志物。下图是TAT的作用机制。
2. 性能表现
针对血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）
2.1化学发光（AE）平台
组合1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965B）标记吖啶酯；
线性范围：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低检出限：0.4 ng/mL。
2.2化学发光（AP）平台
组合1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记碱性磷酸酶（DCE0108L）；
线性范围：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低检出限：0.4 ng/mL。
2.3 稳定性评估
2.3.1 磁珠包被抗体稳定性
采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠浓缩液稀释成磁珠工作液，进行37℃热稳定性实验。如表1所示：
TAT磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内（不含S0），表明TAT磁珠工作液热稳定性良好。
表1 TAT磁珠工作液稳定性7天数据
序号 | TAT抗原稀释 浓度ng/mL | TAT 磁珠工作液37℃ 热加速7天与2℃ -8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | -0.2% |
S1 | 2 | -5.4% |
S2 | 6.91 | -5.4% |
S3 | 16.88 | -10.7% |
S4 | 40.73 | -5.2% |
S5 | 70.95 | -7.6% |
平均变化（不含S0） | -6.9% | |
2.3.2 碱性磷酸酶标记抗体及磁珠包被抗体稳定性
采用碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（货号：DCD0533A）+5%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，将凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记碱性磷酸酶浓缩液稀释成碱性磷酸酶工作液，进行37℃热稳定性实验。如表2所示：
碱性磷酸酶工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内（不含S0），表明TAT碱性磷酸酶工作液热稳定性良好。
表2 TAT碱性磷酸酶工作液稳定性7天数据
序号 | TAT抗原稀释 浓度ng/mL | TAT 碱性磷酸酶工作液37℃ 热加速7天与2℃ -8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | -1.4% |
S1 | 2 | -0.9% |
S2 | 6.91 | 3.2% |
S3 | 16.88 | 9.3% |
S4 | 40.73 | 1.7% |
S5 | 70.95 | 3.3% |
平均变化（不含S0） | 3.3% | |
3. 临床相关性
3.1化学发光（AE）平台
西宝TAT抗体配对组合1（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R2在0.94左右。
西宝TAT抗体配对组合1（＜120 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R2在0.95左右。
3.2化学发光（AP）平台
西宝TAT抗体配对组合2（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R2在0.88左右。
西宝TAT抗体配对组合2（＜120 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R2在0.95左右。
西宝TAT抗体配对组合2（＜120 ng/mL）的发光值与广州万孚 TAT发光试剂赋值临床相关性R2＞0.95。
4. 测试方案
4.1化学发光（AE）平台抗体配对组合1
样本/校准品:加样量20ul；
试剂1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0964B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样品+50ul试剂1，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2化学发光（AP）平台抗体配对组合2
待测抗原：凝血酶-抗凝血酶复合物抗原（货号：EDD0797B）
样本/校准品:加样量10ul；
试剂1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0964C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：10ul样品+50ul试剂1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
5.产品信息
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体 | EKY0964B | 凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0965B）标记吖啶酯（发光配对组合1） |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体 | EKY0965B | |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体 | EKY0964C | 凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体3（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体4（货号：EKY0965C）标记碱性磷酸酶（发光配对组合2） |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体 | EKY0965C | |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1327A | |
DKY1327B | ||
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1327C | |
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0965C）-碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1327D | |
凝血酶-抗凝血酶复合物抗原 | EDD0797B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
蛋白保护剂GH | DCL0009A | 推荐使用浓度5%左右 |
重组碱性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠标记物稀释液（化学发光） | DCD0532A | / |
碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（化学发光） | DCD0533A | / |