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生物制药表征分析工具酶

发布时间:2024-05-14 点击数:77
背景
用作生物药物的治疗性抗体结构复杂,异质性高,在制造过程中需要严格监管和控制。抗体分子大小异质性是抗体的生产工艺优化、生产过程控制及放行分析中重要质控指标之一。为了确保单克隆抗体及其他生物分子药物的安全性和有效性,需要对这些药物进行全面深入的表征分析。
随着获批的抗体药物数量逐年急剧增加,例如mAb、Fc融合蛋白、Fab、ADC、双特异性抗体和双特异性T细胞接合剂(BiTE),了解单个翻译后修饰(PTM)可以更好地分析和预测治疗性抗体的体内功效、药代动力学和作用机制。
治疗性抗体、融合蛋白等的表征通常从三个水平进行,包括自上而下的完整分子量水平、自下而上的多肽水平、亚基水平。常用作治疗性蛋白理化分析的工具酶有PNGase F酶、IdeS酶、Papain、GinsKHAN、GlySERIAS酶、肽图分析用的胰蛋白酶Trypsin、GluC、LysC、糜蛋白酶Chymotrypsin等。
Seebio可提供一系抗体/蛋白理化分析工具酶,用于协助单克隆抗体、融合蛋白药物、生物类似药等生物药的表征分析及其相关翻译后修饰,助力生物药物的开发和质量控制。
蛋白测序肽图分析
蛋白酶
酶切位点
特点
重组胰蛋白酶(质谱级)
赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端
胰蛋白酶β型占比>80%;
比活6200 USP U/mg(相当于18600 BAEE U/mg)
强稳定性,冻融次数可达10次;
和进口品牌比,肽段漏切率更低、蛋白鉴定数更高;
批间差稳定,可提供相关法规支持文件。
重组赖氨酰内切酶(Lys-C)
赖氨酸羧基侧的酰胺、酯和肽键
可单独使用,也可与胰蛋白酶联用,鉴定更多的蛋白数以及磷酸化位点数目;
在4M尿素或者0.1%SDS存在的情况下仍可保持较高的酶活性。
Glu-C蛋白酶
谷氨酸或天冬氨酸残基羧基端肽键
对于分析赖氨酸和精氨酸含量高的蛋白质,与胰蛋白酶联用可显著提高鉴定蛋白数目;
适用于分离和富集磷酸化肽段;
重组人α-糜蛋白酶
酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸的羧基端肽键
特别适用于膜蛋白分析。
糖基化分析工具酶
糖苷酶
名称
酶切位点
特点
唾液酸修饰
唾液酸酶(a2-3,6,8)
糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8键连接的唾液酸
可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸。
唾液酸酶(a2-3,6,8,9)
糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8和a2-9键连接的唾液酸
可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸;
可以耐受0.5%-1.0%的去污剂。
N-糖基化修饰
PNGase F
天冬酰胺和最内侧的GIcNAc之间的糖苷键
适用于抗体和糖蛋白的N-糖基完全去除;
可在变性与非变性条件下切割糖蛋白。
重组Endo H
N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构
适用于抗体或者其它糖蛋白的N-连接高甘露糖的完全去除。
存储液中不含甘油。
O-糖基化修饰
O糖蛋白酶
粘蛋白型O-连接糖(无论是否唾液酸化)的丝氨酸或苏氨酸残基
适用于O-糖基化分析;
无需唾液酸酶预先处理。
抗体切割酶
IdeS Protease和IdeZ Protease是分别来源于化脓性链球菌 (Streptococcus pyogenes)和马链球菌兽瘟亚种 (Streptococcus equi)的重组蛋白酶,该蛋白酶具有极高的底物特异性,能识别人等特定物种和特定类型的IgG,并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。IdeS/Z酶作为工具酶应用于抗体类药物的制备和结构表征分析,是用于表征治疗性抗体、单克隆抗体、抗体偶联药物、Fc融合蛋白和抗体-药物复合物的有价值的工具。
名称
酶切位点
特点
IdeS蛋白酶
特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点
可将lgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。
IdeZ蛋白酶
特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点
可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸;
可以耐受0.5%-1.0%的去污剂。
标签切除工具酶
名称
酶切位点
特点
重组TEV蛋白酶(rTEV Protease)
严格识别七氨基酸序列EXXYXQ(G/S)切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。
一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶,较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强,具有高活性和高特异性的特点。
Seebio蛋白工具酶汇总
蛋白测序肽图分析
货号
产品名称
规格
DCE0060U
重组胰蛋白酶(质谱级,液体)
25ug
100ug
DCE0060T
重组胰蛋白酶(质谱级,冻干)
25ug
100ug
EXK0369B
重组赖氨酰内切酶
20ug
AXJ4266C
重组Glu-C蛋白酶,冻干
25ug
100ug
AXJ4266B
重组Glu-C蛋白酶
20ug
100ug
DCL0640B
重组人α-糜蛋白酶(冻干)
20ug
50ug
100ug
糖基化酶
>ECE0441E
PNGase F重组糖苷酶
20KU
40KU
DCE0447C
重组Endo H
3KU
15KU
DCE0448B
O糖蛋白酶
20U
100U
DCE0457F
唾液酸酶(α2-3,6,8)
500U
2KU
10KU
DCE0457E
唾液酸酶(α2-3,6,8,9)
2KU
10KU
抗体切割酶
ECE0711A
IdeS蛋白酶
700U
ECE0712A
IdeZ蛋白酶
1KU
2KU
标签切除工具酶
EBY3644A
Seebio®重组烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV Protease)
1KU
5KU
10KU
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货号
产品名称
规格
ACH0011F
盐酸胍
1kg
DCH0005D
二硫苏糖醇(DTT)
5g,100g,250g,500g
AAU0091A
碘乙酸
1g,5g
ACC0030
三羟甲基氨基甲烷<结晶>(Tris base)
100g,500g,1kg,25kg
ACC0029
三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(TRIS-HCl)
250g,500g,1kg,25kg