生物制药表征分析工具酶
发布时间：2024-05-14 点击数：83
背景
用作生物药物的治疗性抗体结构复杂，异质性高，在制造过程中需要严格监管和控制。抗体分子大小异质性是抗体的生产工艺优化、生产过程控制及放行分析中重要质控指标之一。为了确保单克隆抗体及其他生物分子药物的安全性和有效性，需要对这些药物进行全面深入的表征分析。
随着获批的抗体药物数量逐年急剧增加，例如mAb、Fc融合蛋白、Fab、ADC、双特异性抗体和双特异性T细胞接合剂(BiTE)，了解单个翻译后修饰(PTM)可以更好地分析和预测治疗性抗体的体内功效、药代动力学和作用机制。
治疗性抗体、融合蛋白等的表征通常从三个水平进行，包括自上而下的完整分子量水平、自下而上的多肽水平、亚基水平。常用作治疗性蛋白理化分析的工具酶有PNGase F酶、IdeS酶、Papain、GinsKHAN、GlySERIAS酶、肽图分析用的胰蛋白酶Trypsin、GluC、LysC、糜蛋白酶Chymotrypsin等。
Seebio可提供一系抗体/蛋白理化分析工具酶，用于协助单克隆抗体、融合蛋白药物、生物类似药等生物药的表征分析及其相关翻译后修饰，助力生物药物的开发和质量控制。
蛋白测序肽图分析
蛋白酶 | 酶切位点 | 特点 |
重组胰蛋白酶（质谱级） | 赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端 | 胰蛋白酶β型占比>80%； 比活≥6200 USP U/mg（相当于18600 BAEE U/mg） 强稳定性，冻融次数可达10次； 和进口品牌比，肽段漏切率更低、蛋白鉴定数更高； 批间差稳定，可提供相关法规支持文件。 |
重组赖氨酰内切酶(Lys-C) | 赖氨酸羧基侧的酰胺、酯和肽键 | 可单独使用，也可与胰蛋白酶联用，鉴定更多的蛋白数以及磷酸化位点数目； 在4M尿素或者0.1%SDS存在的情况下仍可保持较高的酶活性。 |
Glu-C蛋白酶 | 谷氨酸或天冬氨酸残基羧基端肽键 | 对于分析赖氨酸和精氨酸含量高的蛋白质，与胰蛋白酶联用可显著提高鉴定蛋白数目； 适用于分离和富集磷酸化肽段； |
重组人α-糜蛋白酶 | 酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸的羧基端肽键 | 特别适用于膜蛋白分析。 |
糖基化分析工具酶
糖苷酶 | 名称 | 酶切位点 | 特点 |
唾液酸修饰 | 唾液酸酶(a2-3,6,8) | 糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8键连接的唾液酸 | 可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸。 |
唾液酸酶(a2-3,6,8,9) | 糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8和a2-9键连接的唾液酸 | 可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸； 可以耐受0.5%-1.0%的去污剂。 | |
N-糖基化修饰 | PNGase F | 天冬酰胺和最内侧的GIcNAc之间的糖苷键 | 适用于抗体和糖蛋白的N-糖基完全去除； 可在变性与非变性条件下切割糖蛋白。 |
重组Endo H | N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构 | 适用于抗体或者其它糖蛋白的N-连接高甘露糖的完全去除。 存储液中不含甘油。 | |
O-糖基化修饰 | O糖蛋白酶 | 粘蛋白型O-连接糖(无论是否唾液酸化)的丝氨酸或苏氨酸残基 | 适用于O-糖基化分析； 无需唾液酸酶预先处理。 |
抗体切割酶
IdeS Protease和IdeZ Protease是分别来源于化脓性链球菌 (Streptococcus pyogenes)和马链球菌兽瘟亚种 (Streptococcus equi)的重组蛋白酶，该蛋白酶具有极高的底物特异性，能识别人等特定物种和特定类型的IgG，并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。IdeS/Z酶作为工具酶应用于抗体类药物的制备和结构表征分析，是用于表征治疗性抗体、单克隆抗体、抗体偶联药物、Fc融合蛋白和抗体-药物复合物的有价值的工具。
名称 | 酶切位点 | 特点 |
IdeS蛋白酶 | 特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点 | 可将lgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。 |
IdeZ蛋白酶 | 特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点 | 可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸； 可以耐受0.5%-1.0%的去污剂。 |
标签切除工具酶
名称 | 酶切位点 | 特点 |
重组TEV蛋白酶（rTEV Protease） | 严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。 | 一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶，较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强，具有高活性和高特异性的特点。 |
Seebio蛋白工具酶汇总
蛋白测序肽图分析 | ||
货号 | 产品名称 | 规格 |
DCE0060U | 重组胰蛋白酶（质谱级，液体） | 25ug 100ug |
DCE0060T | 重组胰蛋白酶（质谱级，冻干） | 25ug 100ug |
EXK0369B | 重组赖氨酰内切酶 | 20ug |
AXJ4266C | 重组Glu-C蛋白酶，冻干 | 25ug 100ug |
AXJ4266B | 重组Glu-C蛋白酶 | 20ug 100ug |
DCL0640B | 重组人α-糜蛋白酶（冻干） | 20ug 50ug 100ug |
糖基化酶 | ||
>ECE0441E | PNGase F重组糖苷酶 | 20KU 40KU |
DCE0447C | 重组Endo H | 3KU 15KU |
DCE0448B | O糖蛋白酶 | 20U 100U |
DCE0457F | 唾液酸酶(α2-3,6,8) | 500U 2KU 10KU |
DCE0457E | 唾液酸酶(α2-3,6,8,9） | 2KU 10KU |
抗体切割酶 | ||
ECE0711A | IdeS蛋白酶 | 700U |
ECE0712A | IdeZ蛋白酶 | 1KU 2KU |
标签切除工具酶 | ||
EBY3644A | Seebio®重组烟草蚀纹病毒蛋白酶（rTEV Protease） | 1KU 5KU 10KU |
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货号 | 产品名称 | 规格 |
ACH0011F | 盐酸胍 | 1kg |
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AAU0091A | 碘乙酸 | 1g，5g |
ACC0030 | 三羟甲基氨基甲烷<结晶>(Tris base) | 100g，500g，1kg，25kg |
ACC0029 | 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(TRIS-HCl) | 250g，500g，1kg，25kg |