血栓调节蛋白（TM）-磁微粒化学发光法（AE/AP）解决方案

1. 项目背景    

血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）是1981年首次由Esmon等从兔肺中分离提取的一种促进凝血酶活化蛋白C的辅助因子。

急性出血性凝血功能障碍诊治专家共识（2020）》指出：血栓调节蛋白(Thrombomodulin, TM) 为内皮细胞表面的凝血酶受体，抑制凝血酶的活性，增强蛋白C活化性能，血浆TM正常值为3.8～13.3 TU/mL。当内皮细胞受损或功能障碍时，TM表达降低，部分TM被蛋白酶水解至血浆中。因此，TM是内皮细胞受损的标志物。TM升高提示血管内皮损伤，可见于脓毒症、肾功能受损、急性肺损伤等。下图是血栓分子标志物在血栓形成路径中的作用机制。

 血栓分子标志物在血栓形成路径中的作用机制    

2. 性能表现    

针对血栓调节蛋白的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。

2.1 化学发光（AE）平台：    

组合1（两试剂模式）：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）包被羧基磁珠+血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记吖啶酯；    

组合2（三试剂模式）：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）标记生物素+血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；    

线性范围：1 TU/mL-200 TU/mL；最低检出限：1 TU/mL。

样本浓度值在3500 TU/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

   

   

2.2 化学发光（AP）平台：    

组合3（两试剂模式）：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）包被羧基磁珠+血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记碱性磷酸酶；    

组合4（三试剂模式）：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）标记生物素+血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA） （货号：DEG0814A）；    

线性范围：1 TU/mL-200 TU/mL；最低检出限：1 TU/mL。

样本浓度值在3500 TU/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

     化学发光（吖啶酯）平台-三试剂组合校准曲线    

化学发光（吖啶酯）平台-三试剂组合校准曲线    

3.临床相关性    

3.1 化学发光（AE）平台：    

西宝生物发光（AE）平台TM抗体配对组合1（两试剂模式）与希森美康 TM试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物发光（AE）平台TM抗体配对组合2（三试剂模式）与希森美康 TM试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

   

   

3.2 化学发光（AP）平台：    

西宝生物发光（AP）平台TM抗体配对组合3（两试剂模式）与希森美康 TM试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物发光（AP）平台TM抗体配对组合4（三试剂模式）与希森美康 TM试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

   

   

4.测试方案    

4.1 化学发光（AE）平台    

4.1.1抗体配对组合1（两试剂模式）：    

待测抗原:血栓调节蛋白（TM）抗原（货号：EDD0760A）

样本/校准品:加样量50ul；

试剂1：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：50ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；    

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。    

4.1.2 抗体配对组合2（三试剂模式）：    

待测抗原:血栓调节蛋白（TM）抗原（货号：EDD0760A）

样本/校准品:加样量50ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：第一步：50ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育9min；    

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育9min，清洗；    

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。    

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。

4.2 抗体配对组合2（三试剂模式）：    

4.2.1 抗体配对组合3（两试剂模式）：    

待测抗原:血栓调节蛋白（TM）抗原（货号：EDD0760A）

样本/校准品:加样量10ul；

试剂1：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；    

第二步：加入底物，进行测试。    

4.2.2 抗体配对组合4（三试剂模式）：    

待测抗原:血栓调节蛋白（TM）抗原（货号：EDD0760A）

样本/校准品:加样量10ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0940C）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：血栓调节蛋白（TM）抗体（货号：EKY0941C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育5min；    

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育5min，清洗；    

第三步：加入底物，进行测试。    

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。

5.产品信息