PRIME-XV (TM) DENDRITIC CELL MATURATION CDM 树突细胞培养基

PRIME-XV树突细胞成熟培养基提供了一个稳健的受控过程，在化学成分明确的条件下生成 Mo-DC，从而维持其诱导T细胞应答的能力。

●　优化单核细胞向未成熟树突状细胞（iDC）的分化以及随后mDC的成熟

●　实现具有所需特性和形态的树突细胞（DC）的高产率

●　维持树突状细胞对T细胞刺激的效力

●　即用型，只需补充所需的细胞因子混合物

●　设计和生产有助于从研究转移到临床

在存在GM-CSF和IL-4的条件下，来自5个不同供体的富集CD14+ 单核细胞在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM、其他市售培养基 或RMPI+10%FBS中培养6天，以诱导分化，然后在TNF-α、IL-1β、IL-6和 PGE2中再培养2天，以诱导成熟，在各相应培养基中联合培养持续8天。通过流式细胞术分析所得细胞，以测定活细胞密度。产量表示为总活细胞占第0天铺板的初始CD14⁺单核细胞的百分比。

在存在GM-CSF和IL-4的条件下，阴性富集的CD14⁺ 单核细胞在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM中培养6天，以诱导分化，随后在 TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE₂ 中再培养2天，诱导成熟，联合培养持续8天。用小鼠抗人CD80、HLA-DR和Hoechst 33342标记细胞。在30x放大倍数下拍摄免疫荧光图像。

阴性选择的CD14⁺ 单核细胞在PRIME-XVDENDRITIC CELL MATURATION CDM中培养6天，加入GM-CSF和IL-4诱导分化，随后在Jonuleit混合物（TNF-α、IL-1 β、IL-6和PGE2）或Kalinsky混合物（TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IFN-α和Poly（I:C））中再培养2天，以诱导成熟，联合培养持续8天。收获细胞，并用流式细胞仪分析表 面标记物表达。在第0天（单核细胞）、第6天（未成熟DC）和第8天（成熟DC）分析用Jonuleit混合物培养的细胞，显示了整个DC成熟过程中的典型表面标志物表达谱。

第8天收获在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM中培养的Mo-DC，与 同种异体CD4+ T细胞以1:20（DC与T）的比例在添加IL-2的T细胞扩增培养基中共培 养6天。通过CFSE缺失证实T细胞刺激能力（n=3）。CD4⁺ T细胞在无Mo-DC培养的单 独IL-2中或添加抗CD3/抗CD28的IL-2中培养，分别作为阴性和阳性对照。

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