干细胞基质胶-iMatrix系列

层粘连蛋白是存在于动物基底膜的一种细胞外基质，已知其与细胞粘附和增殖息息相关。本产品是与层粘连蛋白 511-E8 片段有同一序列的重组蛋白，是可以促进各种细胞粘附和伸展的培养基质。

大阪大学和京都大学共同研究开发，本产品已证明在操作难度非常大的人 iPS 细胞和人 ES 细胞培养中，也可以安全且高效地进行细胞培养。

层粘连蛋白511是由 α5 链、β1 链和 γ1 链组成的层粘连蛋白。层粘连蛋白 511-E8 是层粘连蛋白片段，但其具有与层粘连蛋白全长分子相同的 α6β1 整合蛋白连接功能。

本产品是 Nippi 根据大阪大学和京都大学的专利技术生产贩卖的。

1. 用 PBS（-）稀释本产品，按照 0.1-1.5μg/cm2加入细胞培养器皿中。

※由于细胞种类和细胞株的不同、使用的培养基种类不同，添加的最适剂量会有差异，初次使用时，按照 0.5 μg/cm2添加培养容器中，逐渐调整至最佳使用浓度。

2.室温下孵育 3 小时，然后去掉溶液。

3. 添加细胞和培养液，进行细胞培养。

4. 培养 ES/iPS 细胞时，可进行无饲养层和单细胞继代培养

使用本产品对表皮细胞培养 0.5 小时，对血管内皮细胞培养 1 小时。

(a) 表皮细胞，培养 0.5 小时

(b) 左（无涂层）：大部分细胞未贴壁。

(c) 右（iMatrix）：多数细胞贴壁并成伸展状态。

(d) 血管内皮细胞，培养 1 小时

左（无涂层）：有贴壁的细胞，但大部分多为圆形。

右（iMatrix）：较少观察到圆形细胞，几乎所有的细胞表现出了很好的伸展性。

实验人员：(株) Nippi BioMatrix 研究所 藤崎

Easy iMatrix-511 是可以直接应用于培养孔板涂层的稀释溶液，有 iMatrix-511 和 iMatrix-511 silk 两种类型的稀释溶液。

本品 1 支（100 mL）可用于大约 11 块 6 孔板。

培养孔板涂层后 iMatrix-511 及 iMatrix-511 silk 的使用方法相同。

Q1：产品是以什么形式销售的？

A1：产品是液体状。一支试管里密封装有0.5 mg/mL浓度的175 μg的细胞培养外基质（层粘连蛋白511-E8片段）。※iMatrix-511的冻干产品已于2015年3月停止生产。

Q2.：产品的存储条件和有效期是什么？

A2.：产品的储存条件为，冷藏保存在2-8°C。（推荐4°C）

2-8°C冷藏条件下产品的有效期，请参考下表。

※具体的有效期详见产品外包装。

Q3：可以冷冻保存吗？

A3：不可以冷冻保存。

Q4.：产品的纯度是多少？

A4.：纯度为95%以上。

Q5.：培养hES/hiPS细胞时使用什么培养基最好？

A5.：宫崎等的论文（Nature communications,3(1236), 1-10, 2012）、（Scientific Reports,7, 41165, 2017）中，使用了以下的培养基。

?mTeSR1,TeSR2,TeSR-E8 (STEMCELL Technologies)

?Stem Pro hESC SFM (Thermo Fisher Scientific)

?StemFit AK03 (Ajinomoto)

中川等的论文（Scientific Reports,4(3594), 1-7, 2014）中使用了以下的培养基。

?StemFit (Ajinomoto)

文献中使用的培养基都出现了良好的结果。

Q6.：培养iPS细胞时，最佳的涂层浓度是多少？

A6.：最佳的涂层浓度根据细胞株的不同也会有所不同。

最初请从浓度0.5 μg/cm2开始尝试，请根据您使用的细胞株在浓度0.1~1.5 μg/ cm2之间考虑。另外，还有文献报道了新的不以涂层包被的添加法。Miyazaki et al.Scientific Reports,7, 41165, (2017)

Q7.：请教我使用iMatrix-511时，培养iPS细胞的步骤。

A7.：使用iMatrix-511时，ES/iPS细胞的扩增培养步骤，请参考以下的链接。

https://www .cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q8.：培养iPS细胞时，需要Rock Inhibitor（Y-27632）吗？

A8.：在中川等的论文（Scientific Reports,4(3594), 2014）中，介绍了只有在传代时添加Rock Inhibitor，更换培养基的时候不需使用。

Q9.：培养iPS细胞时可以单细胞传代吗。

A9.：可以。可参考中川等的论文（Scientific Reports,4(3594), 2014。

或参考以下的链接。

https://www.cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q10：传代时使用什么细胞分离液？

A10：可使用胰蛋白酶。可以参考中川等的论文（Scientific Reports,4(3594), 2014）。

或参考以下链接https://www.cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q11.：可以使用小鼠的iPS细胞吗？

A11.：暂时没有小鼠iPS细胞的培养数据。

Q12.：这个产品与基质胶有什么不同?

A12.：基质胶的层粘连蛋白-111来源于小鼠EHS肉瘤。另外还含有层粘连蛋白以外的分子。

iMatrix-511是将在CHO-S细胞中表达的层粘连蛋白511-E8片段高度纯化后的重组蛋白。

iMatrix-511silk是从蚕结的茧中高纯度纯化层粘连蛋白511-E8片段的重组蛋白。

已知人ES细胞和iPS细胞是通过细胞膜受体（特别是α6β１整联蛋白）粘附于层粘连蛋白-511。已知人ES细胞和iPS细胞对层粘连蛋白-511具有高粘附活性。这使得用iMatrix-511/iMatrix-511silk可以使iPS细胞在单细胞状态下传代。

宫崎等的论文表明（Nature communications,3(1236), 1-10, 201），5次传代后（30天后）的细胞数扩增效率约为基质胶的200倍。

产品的相关技术文章， 请点击：使用层粘连蛋白的非包被法对人hPSC进行有效的贴壁培养iMatrix-511, iMatrix-511 silk http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/resources/show/57.html

iMatrix-332是高纯度人层粘连蛋白332-E8片段（包含整合素结合位点）的产品。

层粘连蛋白-332存在于角质形成细胞和角膜中，已知能够与整合素α3β1蛋白结合。

iMatrix-221是高纯度人层粘连蛋白221-E8片段（包含整合素结合位点）的产品。层粘连蛋白221是由α2链、β2链和γ1链的亚基链组成的层粘连蛋白分子，与层粘连蛋白211同时大量存在于心肌、骨骼肌等肌肉组织的基底膜中，被认为与肌肉细胞分化和功能维持相关。另外，层粘连蛋白221和层粘连蛋白211会与肌肉组织中选择性表达的整合素α7X2β1蛋白结合。据报告显示，在与整合素α7X2β1结合的亲和性方面，层粘连蛋白221比层粘连蛋白211更高。

iMatrix-111是高纯度人层粘连蛋白111-E8片段（包含整合素结合位点）的产品。已知层粘连蛋白111存在于肝脏中，能够与整合素α7X2β1蛋白和α6β1蛋白结合，被认为与维持肝脏功能有关。

iMatrix-411利用CHO-S细胞生产的高纯度人层粘连蛋白411-E8片段产品。
● 将人层粘连蛋白411-E8 片段基因导入CHO-S细胞生产的高纯度提取物。
● 把使用iMatrix-511培养的iPS细胞在iMatrix-411中培养，可以促进其向血管内皮细胞的分化诱导。
● 可进行无饲养层培养。