不一样的细胞处理解决方案 - CAR-T
发布时间：2023-09-06 点击数：164
想知道如何给「特种兵」装上导航变身CAT-T攻击肿瘤细胞？
一 人体的“特种兵”T细胞
人体在受到外源病原体入时，人体免疫功能会自动识别这种“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质（如病菌等），同时也能识别并破坏人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。 参与人体免疫功能的特异性成分主要是B细胞和T细胞，一个成年人的体内有大约3000亿个T细胞，这一数量已经充分地显示了T细胞的重要性。作为白细胞的一种，T细胞有着不可替代的作用。就像人体中的“军队”T细胞，T细胞有七个兄弟姐妹，在遇到敌情的时候，直接协调参战，歼灭“敌人”。所以T细胞一直有着人体“特种兵”的称谓。 |  |
问题来了，肿瘤细胞是如何突破T细胞特种兵的防御？如何破解肿瘤逃逸T细胞之局?
答案请往下看：
二 CAR-T的前世今生
在19世纪末20世纪初，癌症免疫学之父William Coley医生通过“Coley毒素”开启了免疫疗法处理癌症的历史。但是受限于当时科学的发展，那时人们并不了解背后的原理，直到后续人们对免疫系统的了解不断深入，才得以发现——原来是混合的细菌和病毒激活了人体免疫，从而形成联动的免疫效果导致肿瘤消退。
也正是认识到这一原理，人们开始寻找可以用来对健康支持症的免疫细胞种类—— ，目标就锁定到了T细胞。
一开始，人们只是将肿瘤周围的T细胞或者血液中的T细胞收集起来，在体外进行扩增培养，再回输进入到人体，发挥其杀伤作用。这种方法在部分患者中取得了一定的效果，但是更多的患者无法从这种处理方法中长久受益。
在进一步的研究中发现，原来癌细胞会“隐藏”自己的特征，就算T细胞再多，可能也无法找到癌细胞并杀死癌细胞。于是研究人员想到了一个办法：我们可以将肿瘤的特征信息（肿瘤特异性抗原）提取出来，通过实验室分析将可以识别这些信息的片段分离出来，再给到T细胞，帮助T细胞找到癌细胞，从而发挥其杀伤作用。
这就是CAR-T细胞的由来。CAR-T细胞的全称为Chimeric Antigen Receptor T Cell，中文直译为嵌合抗原受体T细胞，即我们给T细胞加入了可以识别特定抗原的受体（目前主要为癌细胞的特征受体），使得T细胞可以特异性识别带有特定抗原的细胞。
自1989年， CAR-T细胞疗法诞生，经过三十多年的发展到现在已经是第四代CAR-T，越来越精准。CAT-T在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的处理上有着显著的正面影响，被认为是较有前景的肿瘤处理方式之一。
CAR-T的发展历程（图片来源：参考资料1）
三 体外制备超级战士“CAT-T”流程
体外制备CAT-T流程
Seebio满足您 CAR-T细胞制备从工艺到生产不可或缺的WAKO独色产品
3.1 质粒生产
酵母粉(酵母提取物)
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
394-02131 | DRIEDYEAST EXTRACTSH 酵母提取物SH | 250g |
398-02151 | DRIEDYEAST EXTRACTD-3H 酵母提取物D-3H | 250g |
396-02157 | 10kg | |
393-02167 | DRIEDYEAST?EXTRACTFH 酵母提取物FH | 10kg |
555-35895 | Yeastextract酵母提取物 【无动物源，Kosher认证】 | 500g |
553-35891 | 5kg |
原核发酵蛋白胨
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
392-02115 | HIPOLYPEPTON 新西兰酪蛋白源多聚蛋白胨【JP级别】 | 500g |
398-02117 | 20kg | |
398-02173 | HIPOLYPEPTON S 植物源多聚蛋白胨S | 300g |
398-02178 | 10kg | |
397-02121 | HIPOLYPEPTON N 大豆源多聚蛋白胨N | 300g |
395-02127 | 10kg | |
393-02101 | HIPOLYPEPTON NS 大豆源多聚蛋白胨NS | 300g |
391-02107 | 10kg |
3.2慢病毒包装
BalanCD™ 无血清细胞培养基
| ● cGMP级别 | ● 可以提供液体及粉末形式 |
| ● 无血清 | ● 已取得DMF |
| ●化学成分限定 | ● 适应小试剂放大 |
HEK293系列：基因处理病毒载体生产，蛋白瞬时表达 ·重组蛋白生产
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
91165-1L | BalanCD HEK293 BalanCD HEK293培养基 | 1L |
94137-10L | 10L | |
94137-100L | 100L | |
91166-500ML | BalanCD HEK293 Feed BalanCDHEK293补料 | 500mL |
981444-10L | 10L | |
981444-100L | 100L |
Seebio 293细胞专用培养基
产品编号 | 产品名称 | 产品说明 | 产品规格 |
SeeHEK293CD01基础培养基(液体) | (无动物源，化学成分限定,不含水解物，含微量生长因子 ) | 1L | |
SeeHEK293CD01基础培养基(干粉) | 10L 100L | ||
SeeHEK293CD02基础培养基(液体) | (无动物源，化学成分限定,不含水解物和生长因子) | 1L | |
SeeHEK293CD02基础培养基(干粉) | 10L 100L | ||
SeeHEK293CD03,基础培养基（液体） | 原始培养基已经含有4mM Gln | 1L | |
SeeHEK293CD03,基础培养基(干粉) | 10L 100L | ||
SeeHEK293FM01,补料培养基 | 液体补料 A 含有60g/L 的葡萄糖，补料 B 不含葡萄糖。 | 1L+100ml | |
SeeHEK293FM01,补料培养基(干粉) | 10L+1L 100L+10L | ||
Seebio® 条件培养液(293T) | 含有细胞分泌物的培养液 | 10ml 250ml |
转染试剂
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
385-18731 | GenomONE®-Neo EX(FD) GenomONE®-NeoEX（FD）转染试剂套装（可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染！） | 1 set |
381-18733 | 4 sets | |
389-18734 | 16 sets | |
385-18736 | 40 sets | |
Seebio® 线性聚乙烯亚胺（PEI 40,000） | 10mg 100mg 1g | |
线性聚乙烯亚胺PEI（Polyethylenimine） 转染试剂 | 1ml 10ml 50ml | |
Seebio® 线性聚乙烯亚胺（PEI 25,000） | 1g |
抗生素及平衡盐缓冲液
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
Hanks平衡盐粉剂(1×HBSS,含酚红) | 1L | |
PBS 缓冲液 | 500ml | |
293-72601 299-72603 | D-PBS(-), Powder | 1Lx10 10L |
168-23191 | Penicillin-Streptomycin Solution（x100）青霉素-链霉素溶液（x100） | 100 mL |
164-25251 | Penicillin-Streptomycin Solution（x50）青霉素-链霉素溶液（x50） | 100 mL |
*有链接为 Seebio自有品牌产品
3.3 T细胞激活扩增
T细胞激活
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
031-08774 | 伴刀豆球蛋白A | 250mg |
031-08774 | 伴刀豆球蛋白A | 1g |
ALyS™ 505N免疫细胞处理研究用无血清培养液
- 适用于免疫细胞处理用的液体培养基
- 用于人末梢血T细胞大量增殖
- 不使用异种动物来源蛋白成分
产品编号 | 产品名称 | 产品说明 | 产品规格 |
1020P10/87-661 | ALyS505N-0 | 免疫细胞处理研究用无血清培养液（不含IL-2） | 1,000mL(P) |
1020C10/87-669* | 1,000mL(CB) | ||
10217P10/87-654 | ALyS505N-175 | 免疫细胞处理研究用无血清培养（IL-2 175IU/mL） | 1,000mL(P) |
10217C10/87-598* | 1,000mL(CB) | ||
1027P10/87-666 | ALyS505N-7 | 免疫细胞处理研究用无血清培养液（IL-2 700IU/mL） | 1,000mL(P) |
1,000mL(CB) | |||
10210P10/87-676 | ALyS505N-10 | 免疫细胞处理研究用无血清培养液（IL-2 1,000IU/mL） | 1,000mL(P) |
1,000mL(P) |
PRIME-XV T CELL CDM
第一款市售的化学成分明确、无动物成分的培养基，用于人源T细胞的扩增和培养。 对该配方进行了优化，以提供持续旺盛的生长，同时保持T细胞功能和效力。
- 经过优化，支持细胞旺盛生长，同时保持功能性
- 保证批间一致性
- 去除未明确组分对T细胞表型的影响
- 支持靶向T细胞类型（如Th1和调节性T细胞）的极化
产品编号 | 产品名称 | 成分 | 产品规格 |
91154 | PRIME-XV T CELL CDM | 化学成分明确、无动物成分配方、不含抗生素或酚红 | 1L |
透气培养袋
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
87-352 | Culture Bag A-350NL | 5 sets |
87-302 | Culture Bag A-1000NL | 5 sets |
87-360 | Connecting tube for culture bag | 50 pieces |
防止细胞结团 支持高密度培养
低分子量葡聚糖硫酸钠（DSS 5000）
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
197-08362 | Sodium Dextran Sulfate 5,000 葡聚糖硫酸钠盐5,000（生化级） | 25g |
199-08361 | 100g | |
191-08365 | 500g | |
194-13402 | Sodium Dextran Sulfate 5,000 葡聚糖硫酸钠盐5,000（分子级） | 25g |
196-13401 | 100g | |
198-13405 | 500g |
消泡剂
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
>016-17431 | Antifoam SI 消泡剂SI | 100ml |
018-17435 | Antifoam SI 消泡剂SI | 500ml |
010-17191 | Antifoam PE-H 消泡剂PE-H | 100ml |
012-17195 | Antifoam PE-H 消泡剂PE-H | 500mL |
010-17211 | Antifoam PE-M 消泡剂PE-M | 100mL |
012-17215 | Antifoam PE-M 消泡剂PE-M | 500mL |
013-17201 | Antifoam PE-L 多醚型消泡剂（多醚-低型） | 100mL |
015-17205 | Antifoam PE-L 多醚型消泡剂（多醚-低型） | 500mL |
细胞解离
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
203-20251 | Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red,AF 胰蛋白酶EDTA溶液（无酚红） | 100ml |
207-20271 | Trypsin-EDTA Solution(High Trypsin) without Phenol Red,AF 胰蛋白酶EDTA溶液（无酚红） | 100ml |
3.4 细胞冻存液
BAMBANKER????无血清细胞冻存液???用户文献众多 | |||
产品编号 | 英文名称 | 应用 | 规格 |
302-14681 | BAMBANKER' | 常规工具细胞，干细胞，PBMCs,免疫细胞，类器官等 | 120mL |
306-14684 | 20 mL×5 | ||
3.5 质控
品牌 | 产品编号 | 产品名称 |
WAKO | 548-10141等 | PYROSTARm ES-F系列鲎试剂系列-多次型 |
WAKO | 295-72301等 | PYROSTARm ES-F系列鲎试剂系列-单次 |
WAKO/Enzo | ENZ-KIT127-0001 | E. coli host cell protein ELISA kit |
WAKO/Enzo | ENZ-KIT162-0001 | HEK293T宿主细胞蛋白ELISA试剂盒 |
四 其它细胞处理相关产品系列
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
500-01 | CTGrade rh IL-2c126s | 50ug 100ug 1mg |
500-07 | CTGrade rh IL-7 | 50ug 100ug 1mg |
500-08 | CTGrade rh IL-15 | 50ug 100ug 1mg |
500-09 | CTGrade rh?IL-21 | 50ug 100ug 1mg |
参考资料：1.Critical care management of chimeric antigen receptor T-cell therapy recipients
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