PROTEOSTAT(R)蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒

PROTEOSTAT^® 蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒

确定蛋白质重折叠优化条件和功能蛋白峰值回收率

●　不仅仅是针对重折叠 - 通过完整的工作流程，使用PROTEOSTAT®染料确定非通路蛋白质聚集的条件

●　一整套优化的筛选试剂和有助于蛋白质重折叠的条件。

●　使用实验设计值（DOE）进行快速微孔板筛选，以确定对蛋白质形成至关重要的参数。

PROTEOSTAT^® 蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒，提供了统一采用分数因子矩阵的分析方法，便于在不同缓冲液体系的蛋白质重折叠的参数。它也是一种使用专有红色发射光聚集敏感的分子转子染料监测蛋白质聚集的简单统一的分析方法。对于低荧光读数的特定样品（因此聚集成分少），可采用传统的根据酶活测定重折叠成功率的方法进行验证。

图1：在氧化还原环境下重新折叠溶菌酶。根据DOE矩阵（产品说明书，表1）进行实验设计。具体而言，20 mg/mL溶菌酶首先在4°C的6M胍溶液中变性18小时。然后，将变性溶菌酶以1:20稀释到不同的折叠缓冲液中，并在4°C下培养过夜。进行PROTEOSTAT®蛋白质重折叠和聚集灵敏分析时，将1:20稀释的重折叠溶液直接添加到含染料的PROTEOSTAT®分析缓冲液中，并测定荧光强度（Ex=550 nm，Em=610 nm）。折叠缓冲液中溶菌酶的酶活，是使用20µg/mL溶血微球菌（Micrococcus lysodeikticus）细胞壁测量，该细胞壁被荧光素过量标记，引发染料淬灭。当溶菌酶作用于该底物时，细胞壁上未被染色标记的片段被释放。测定荧光强度增加（Ex/Em 490/520nm）。经PROTEOSTAT®分析缓冲液中稀释的天然蛋白质可作为聚集和活性测定的参照。具有高聚集信号的重折叠溶液通常具有低酶活性，因此应避免。1A-15A：含DTT；1B-15B：含GSH/GSSG。

图2:确定重折叠缓冲液13B具有高活性和低荧光，如图1所示，并被选来评估溶菌酶重折叠时的赋形剂的影响。赋形剂单独添加到含GSH/GSSG的折叠缓冲液中，并分析其聚集和活性，如图1所示。结果表明，氯化镁在z重折叠缓冲液13B中促进重折叠效果最好，聚集趋势最小。

◆产品详情

应用特点	PROTEOSTAT®蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒，提供了统一采用分数因子矩阵的分析方法，便于在不同缓冲液体系的蛋白质重折叠的参数。它也是一种使用专有红色发射光聚集敏感的分子转子染料监测蛋白质聚集的简单统一的分析方法。
品质保证	按手册所述的规程，将变性溶菌酶重折叠以比较不同缓冲液中的相对荧光。
数量	192次反应
使用/稳定性	如果储存得当，试剂盒组分自收到之日起可稳定一年。
储存条件	避光。避免反复冻融。
运输方式	干冰运输
储存温度	-20°C
组分	PROTEOSTAT® 检测试剂, 22 µl 10X PROTEOSTAT® 分析缓冲液, 1 x 2 ml 2X 折叠缓冲液 1-15, 10 ml each 溶菌酶标准, 10 mg 变性剂: 6M 盐酸胍 (GdnHCl), Tris盐酸盐l (pH 8), 14 ml 100 mM DTT, 1 ml GSH, 46.1 mg GSSG, 18.4 mg 10 mM 聚乙二醇, 1 ml 500 mM EDTA, 1 ml 400 mM 氯化钙, 1 ml 400 mM 氯化镁, 1 ml 1 M 氯化钠, 1 ml 0.1% 吐温20, 1 ml 1.2 M 蔗糖, 1 ml α-环糊精 (200 mg/ml), 1 ml
技术信息/产品说明	PROTEOSTAT®蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒是PROTEOSTAT®试剂和分析试剂盒产品线一员，已在蛋白质聚集应用中进行了广泛测试。PROTEOSTAT®试剂和试剂盒最适合使用显微镜、流式细胞仪、微板读数器和HCS/HTS进行的蛋白质分析，对一致性和再现性有要求。
监管状态	RUO - 仅供研究使用

◆参考文献

Aggregation analysis of therapeutic proteins, part 1: T. Arakawa, et al.; Bioprocess International 4 (10), 32 (2006),
Investigation of protein refolding using a fractional factorial screen: A study of reagent effects and interactions: M. Willis, et al.; Protein Sci. 14, 1818 (2005),
Structure of the cross-beta spine of amyloid-like fibrils: R. Nelson, et al.; Nature 435, 773 (2005),
High-throughput automated refolding screening of inclusion bodies: R. Vincentelli, et al.; Protein Sci. 13, 2782 (2004),

◆产品列表

产品编号	产品名称	包装
ENZ-51040-KP002	PROTEOSTAT^® 蛋白质重折叠和聚集灵敏试剂盒 PROTEOSTAT^® Protein refolding and aggregation sensing kit	2x96 wells

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