西宝生物KroVin300防腐剂抑菌实验和效果 - 细菌篇
发布时间：2022-11-02 点击数：269
一、实验原理
利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，已显示其抑菌作用。实验通过抑菌圈大小判断其是否具有抑菌能力。
二、实验器材
100mm培养皿、离心管、移液器、超净台、计数板、生理盐水、生化培养箱、无菌蒸馏水、接种环、大豆酪蛋白琼脂培养基等。
菌种：
自然菌液: 吸取西宝生物实验室水槽，卫生间下水池，一楼下水管，以及大门口的养鱼池的水，一共大约20ml, 进行自然沉降，取上清液部分。
防腐剂：
1.Seebio KroVin300防腐剂（共四个批次，用P1、P2、P3、P4标识）
2.某进口品牌的P**300
2.某进口品牌的P**300
三、实验步骤
1、实验工具准备及灭菌
2、培养基制备
称取10.5g培养基干粉，加入300ml纯化水，搅拌加热煮沸至完全溶解。再加入6g的葡萄糖，搅拌溶解。向各培养皿内注入约20ml的熔化状琼脂培养基(约45℃)，待其冷却，备用。
3、防腐剂配制
用蒸馏水对不同类防腐剂分别按照1:250、1:500、1:1000、1：2000配制 ，做好标记。
4、菌悬液制备
取适量菌种加入生理盐水1ml,稀释10倍，采用平板计数法，稀释，得到10^6CFU/ml浓度菌悬液。
5、试验菌接种
10^6CFU/ml试验菌悬液0.2ml,将其接种到已经倒好培养基的培养皿内，用涂布棒涂布均匀（每次使用涂布棒前酒精灯下灭菌），盖好培养皿。
6、添加防腐剂
6.1 纸片法
用镊子将圆片约5.5mm滤纸平均放置在培养皿上，每个培养皿放置4个圆滤纸（4个防腐剂浓度用）。吸取不同种类，不同浓度的防腐剂3ul，加入到圆滤纸中，让防腐剂溶液分布满整个滤纸，但又不溢出，盖好培养皿。
6.2 打孔法
在培养皿里培养基上打4个孔，用100ul枪头打孔。各孔中心之间相距25mm左右，与培养皿边缘相距15mm以上。每个培养皿为一种防腐剂的4个浓度。用微量移液器吸取防腐剂6ul到孔内，让防腐剂刚好齐培养基面，盖好培养皿。
7、培养并观察抑菌效果
于37℃生化培养箱中正置培养，培养16-18小时观察结果。测量抑菌圈并记录。
四、实验结果
1、纸片法实验数据和图片
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16h
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防腐剂1
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防腐剂2
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防腐剂3
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防腐剂4
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P**300
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1/250
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2.2
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2.0
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1.9
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2.1
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1.4
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1/500
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1.7
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1.7
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1.5
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1.7
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1.1
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1/1000
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1.5
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1.5
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1.2
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1.4
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0.6
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1/2000
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0.6
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0.8
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0.9
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1.2
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0.5
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2、打孔法实验数据和图片
打孔法（1/10）
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16h
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防腐剂1
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防腐剂2
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防腐剂3
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防腐剂4
|
P**300
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1/250
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2.2
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2.2
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2.0
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2.2
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1.5
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1/500
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1.9
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1.8
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1.6
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1.9
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1.1
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1/1000
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1.5
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1.5
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1.4
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1.5
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0.9
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1/2000
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1.1
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1.0
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1.0
|
1.2
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0.6
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打孔法（1/2）
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16h
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防腐剂1
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防腐剂2
|
防腐剂3
|
防腐剂4
|
P**300
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1/250
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2.2
|
2.0
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1.9
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2.1
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1.5
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1/500
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1.8
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1.7
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1.6
|
1.7
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1.2
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1/1000
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1.5
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1.4
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1.3
|
1.5
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0.9
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1/2000
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1.1
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1.0
|
1.1
|
1.1
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0.5
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结论
从两次实验结果来看，防腐剂P1-P4的抑菌效果都是优于对照P**300的抑菌效果。
从抑菌浓度来看，防腐剂P1-P4的1/1000的效果跟对照P**300的1/250的效果相当。
总结
总体来看，西宝的公司KV300之P1-P4批次的抑菌效果明显优于P**300，1：1000～1：2000高稀释倍数的抑菌效果差距明显。故建议具体使用浓度视溶液营养份而定，但不宜稀释过低。实验显示西宝KroVin300在细菌、霉菌、酵母菌的杀菌抑菌效果上明显优于某进口品牌的P**300。
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KroVin系列防腐剂产品列表
| 物料编码 | 产品名称 | 包装规格 |
| ACN0054A | KroVin 100 | 100ml,500ml,1L |
| ACN0037B | KroVin 300 | 25ml,100ml,500ml,1L,5L |
| ACN0046A | KroVin 500 | 25ml,100ml,500ml,1L |
| ACN0043B | KroVin 950 | 25ml,100ml,500ml,1L,5L |
| ACN0911A | KroVin 1100 | 25ml,500ml,5L |
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