西宝生物——Wako生物制药中残余DNA抽提试剂盒

本产品是血清中含有的病毒DNA和生物制品宿主细胞残余DNA的提取试剂盒,无有毒溶剂、提取时间短、DNA提取纯度高、DNA回收率高。

高浓度的促溶剂碘化钠和阴离子去垢剂参与生物制品中蛋白质和脂质的溶解，然后在混合物中加入工业酒精，糖原和核酸共沉淀可作为载体，而碘化钠和阴离子去垢剂阻止样品中蛋白等成分的沉淀使其溶于液相，从而选择性沉淀DNA。

2 - 10℃，试剂盒的保存期为2 - 3 年。

试剂准备：

1） DNA 提取之前，试剂提取如下：

26 ml 碘化钠溶液加入6 ml 蒸馏去离子水稀释，

再加入1 ml 月桂酰肌氨酸钠和65 μl 糖原溶液并混合均匀。

2） 向洗涤溶液（B）加入2 μl 糖原溶液并立即混合均匀。

注意事项：

1） 用于稀释Nal 溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。

2）  配制好的洗涤溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原溶液到无菌离心管中至合适体积即可。

3） 在保存期间Nal 溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。

DNA 提取步骤：

1） 吸取100 μl 的血清样品加入1.5 ml 微量离心管；

2） 再加入300 μl 配制好的Nal 溶液至离心管并混合均匀；

3） 将离心管在60℃恒温容器中加热15 分钟；

4） 取出离心管，加入400 μl 工业酒精至离心管并混合均匀；

5） 离心管在室温静置15 分钟后离心10,000 g 15 分钟；

6） 尽可能多地吸取上清液，将离心管倒置在纸面上除去残留溶液；

7） 加入1 ml 配制好的洗涤溶液（B）重悬浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀从离心管壁上弹开；

8） 短暂离心10,000 g 5 min，去除上清液，将剩余沉淀真空干燥，用于后续的DNA 分析。

试剂预处理:

1） 将65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化钠溶液；

2） 将2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗涤溶液（B），立即混合均匀。

注意事项：

1） 用于稀释碘化钠溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。

2） 配制好的洗涤溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原  溶液到无菌离心管中至合适体积即可。

3） 在保存期间碘化钠溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。

4） 提取步骤应在DNA 变性之前，因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA  污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。

DNA 提取步骤：

1） 吸取400 μl 或500 μl 的样品加入2 ml 无菌带盖微量离心管并混合均匀；

2） 吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸钠溶液加入微量离心管并混合均匀；

3） 再加入500 μl 包含糖原的碘化钠溶液至混合溶液，涡旋后在40℃保温15 分钟；

4） 加入900 μl 工业酒精至混合溶液，涡旋后静置于室温15 分钟；

5） 短暂离心10,000 g 15 min  后，能看见管壁有白色沉淀，吸取上清液后将离心管倒置于纸面去除残留溶液；

6） 加入800 μl 洗涤溶液（A）至离心管，剧烈涡旋使白色沉淀从离心管壁上弹开；

7） 短暂离心10,000 g 5 min 后，去除残留溶液；

8） 加入1500 μl 包含糖原的洗涤溶液（B）至离心管并涡旋，短暂离心10,000 g 5 min  后吸取上清液，剩余的白色沉淀包括DNA 和糖原载体；

9） 加入分析用缓冲液(Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后续的DNA 分析。

注意事项：

请于各步骤使用搅拌器将溶液搅拌均匀。样品溶液里含有DNA酶时，进行步骤2之前请先进行步骤3。步骤4里样品未溶解完时，请把保温温度升至40-60℃帮助溶解。但是含有部分蛋白（γ-球蛋白）或高浓度蛋白的样品（＞50mg/ml），加热可能会导致蛋白聚集，请注意。