告别
发布时间:2026-09-24 点击数:4
在糖基化分析的世界里,较为棘手的场景之一,莫过于HILIC-FLR图谱上信号理想、峰形漂亮,但一进质谱就"哑火"--低丰度糖型完全淹没在噪声中。2-AB标记作为沿用多年的"金标准",其在质谱检测中电离效率相对有限的问题,让1%以下的微量糖型成了"看不见的多糖"。
Ludger普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒,正是为解决这一核心痛点而来。它采用与2-AB/2-AA相同的还原胺化标记化学,但凭借普鲁卡因酰胺(Procainamide, PROC)独特的季胺结构,在ESI-MS正离子模式下实现显著高于传统染料的电离效率,有效提升痕量糖型的检出灵敏度。
西宝生物科技(上海)股份有限公司作为Ludger Ltd.中国区总代理,为国内用户提供该试剂盒及全套糖基化分析解决方案。自2015年1月23日正式获得Ludger全球业务拓展经理签署的授权证书以来,西宝生物持续为国内生物制药企业和科研机构提供原厂正品与本地化技术支持。
一、为什么选择普鲁卡因酰胺?-- 与2-AA、2-AB的硬核对比
普鲁卡因酰胺标记技术核心的优势,在于它同时兼容荧光检测与质谱检测,且在两个维度上都不妥协:
荧光灵敏度:普鲁卡因酰胺标记多糖的荧光响应显著高于2-AB标记,峰高可达2-AB标记多糖的3倍以上(数据来源于Ludger技术资料,不同实验条件下结果可能存在差异)。
质谱灵敏度:这是普鲁卡因酰胺的"核心优势"。其ESI电离效率相比2-AB提升可达30倍(数据来源于Ludger技术资料),不同实验条件下结果可能存在差异。这意味着以往在2-AB标记下相对峰面积小于1%、易被噪声掩盖的微量糖型,在普鲁卡因酰胺标记体系中可以被ESI-MS清晰鉴定。
结构完整性:唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐的损失不可检测(<2摩尔百分比),有助于保持糖型结构的真实还原。
方法兼容性:采用与2-AB和2-AA相同的还原胺化标记化学,实验人员无需重新学习一套陌生的操作体系。
应用范围:不仅适用于N-糖,还覆盖O-糖、GSL-糖、肝素以及各类具有还原末端的糖类。
对比速览:
指标 | 2-AB | 普鲁卡因酰胺(PROC) |
荧光响应 | 基线 | 3倍以上 |
ESI-MS信号 | 基线 | 可达30倍 |
低丰度糖型(<1%)鉴定 | 困难 | 可鉴定 |
适用糖型 | N-糖为主 | N-糖/O-糖/GSL-糖/肝素 |
标记化学 | 还原胺化 | 还原胺化(相同) |
二、即用型试剂盒,覆盖24/96样本规格
Ludger普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒提供两种规格,满足不同通量需求:
LT-KPROC-24(24样本规格)和 LT-KPROC-96(96样本规格),均包含完整的标记试剂组分。
以96样本规格为例,试剂盒包含:
· Procainamide dye(LT-PROC-96,130 mg):普鲁卡因酰胺染料,标记反应的核心试剂
· Sodium cyanoborohydride(LT-CYANOB-96,72 mg):还原剂,驱动还原胺化反应
· 30% acetic acid in DMSO(LT-ACETIC-DMSO-96,2000 µL):标记反应溶剂体系
另有使用2-吡啶硼烷(2PB) 作为还原剂的版本LT-KPROC-VP24,操作条件相对温和,适合对操作安全性有较高要求的实验室。
关键产品参数:
· 标记样本量范围:25 pmol - 25 nmol 多糖/样本
· 荧光特性:λex = 310 nm,λem = 370 nm
· 标记选择性:基本实现化学计量标记
· 储存条件:室温避光,试剂稳定期不低于两年(具体以产品标签及说明书标示为准)
· 运输条件:常温运输
三、标记原理与操作流程 -- 2小时完成,1小时核心孵育
普鲁卡因酰胺标记采用经典的还原胺化反应:普鲁卡因酰胺染料的氨基与多糖还原末端的醛基发生缩合形成席夫碱,随后在还原剂作用下将席夫碱还原为稳定的仲胺,从而实现染料与多糖的共价偶联。
操作时间线(LudgerTag™标准流程):
步骤 | 耗时 | 累计时间 |
样品准备与试剂配制 | ~45 min | 0.75 h |
配制并加入标记试剂 | 15 min | 1 h |
65°C孵育标记反应 | 1 h | 2 h |
标记后纯化(LudgerClean) | ~1 h | 3 h |
普鲁卡因酰胺标记流程图
核心标记孵育仅需1小时,整个标记流程2小时即可完成。动力学研究表明,大多数N-糖在1小时内即可达到95%以上的标记效率(数据来源于Ludger技术资料),这为高通量生物工艺分析(PAT)场景提供了坚实基础。(如需要详细的操作说明书,请致电西宝生物400-021-8158)
四、数据说话 -- 普鲁卡因酰胺标记的真实表现
普鲁卡因酰胺 vs 2-AB 荧光响应对比
普鲁卡因酰胺标记多糖的荧光峰高可达2-AB标记的3倍以上(数据来源于Ludger技术资料),在HILIC-FLR分析中即可获得更灵敏的定量结果。
普鲁卡因酰胺 vs 2-AB LC-ESI-MS信号对比
普鲁卡因酰胺的ESI电离效率相比2-AB提升可达30倍(数据来源于Ludger技术资料)。在相同进样量下,2-AB标记下信噪比不足的低丰度糖型,在普鲁卡因酰胺标记体系中可获得清晰可辨的质谱峰。
五、订购信息
西宝生物(Ludger中国区总代理)订购热线:400-021-8158
普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒
货号 | 品名 | 规格 |
LT-KPROC-24 | 普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒 | 24样本 |
LT-KPROC-96 | 普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒 | 96样本 |
LT-KPROC-VP24 | 普鲁卡因酰胺多糖标记试剂盒, 2-吡啶硼烷(2PB) | 24样本 |
普鲁卡因酰胺标记多糖标准品(部分代表性产品)
货号 | 品名 | 规格 |
CPROC-IGG-02 | IgG N-多糖文库,普鲁卡因酰胺标记 | 50 pmol |
CPROC-GHP-30 | 葡萄糖均聚物梯(普鲁卡因酰胺标记) | 30 runs |
CPROC-NGA2-01 | NGA2多糖(G0),普鲁卡因酰胺标记 | 20 pmol |
CPROC-NA3-01 | NA3多糖(A3G3),普鲁卡因酰胺标记 | 20 pmol |
CPROC-A1F-01 | A1F多糖(FA2G2S1),普鲁卡因酰胺标记 | 20 pmol |
CPROC-MAN6-01 | Man-6多糖,普鲁卡因酰胺标记 | 20 pmol |
CPROC-STP-NEUAC-01 | 唾液酸酶检测组合标准品,普鲁卡因酰胺标记 | 20 pmol |
此外,Ludger还提供LudgerClean普鲁卡因酰胺标记后纯化板(LC-PROC-96)等配套产品,以及完整的N-糖释放与普鲁卡因酰胺标记工作流模块(含PNGase F酶),实现从糖释放到标记到纯化的一站式流程。
告别"看不见的多糖",从选择普鲁卡因酰胺标记开始。
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