DAR 2，不多不少刚刚好——定点偶联如何让ADC“表里如一”

DAR （Drug-to-Antibody Ratio，药物-抗体比）指平均连接在每个单克隆抗体上的细胞毒性载荷（Payload）分子的数量。它是抗体偶联药物 (ADC) 的关键质量属性（CQA），DAR 直接决定了药物的效力、抗原结合能力、体内稳定性和毒性特征。 DAR过低，药效难以企及；DAR过高，毒性风险随之攀升。

传统随机偶联带来的DAR异质性，使每批产品都成为DAR 0、2、4、6乃至8的复杂混合物--有的抗体空载，有的超载，疗效与安全性之间微妙的平衡始终难以把握。而DAR 2，被公认为疗效与药代动力学特性的黄金平衡点，但真正的挑战在于如何让每一个ADC分子都“表里如一”：结构均一、行为一致、批间可重复。为此，西宝生物隆重推出基于Fc糖基化位点定点修饰的GlyCLICK® ADC技术平台，让DAR恒等于2，详情咨询400-021-8158

产品介绍

GlyCLICK® ADC是一套基于酶法修饰与点击化学的定点偶联试剂盒，用于将天然IgG与携带高活性毒素（MMAE或PNU）的可裂解连接子进行位点特异性偶联。

该技术平台的核心优势在于：

· 无需抗体工程化--直接使用天然IgG即可完成定点偶联

· DAR 2均一--每个抗体分子精准偶联两个payload，产物高度均一

· 保留免疫反应性--修饰位点位于Fc段，远离抗原结合区

· 全流程适用--从早期研发到临床规模生产，同一套方案贯穿始终

GlyCLICK ADC试剂盒提供两种高活性payload选择：

payload	作用机制
MMAE（单甲基奥瑞他汀E）	抑制微管组装和微管蛋白依赖性GTP水解，导致细胞周期阻滞和凋亡
PNU（蒽环类DNA烷化剂）	通过DNA烷化引发凋亡，效力显著高于微管靶向payload

两种payload均配备独特的两步酶解释放机制连接子。

核心原理

GlyCLICK采用三步酶法偶联技术，利用所有IgG抗体天然存在于Fc段的N-糖基化位点进行定点修饰。

第一步--去糖基化

使用固定化的GlycINATOR®（一种Fc特异性内切糖苷酶），将Fc段上复杂的N-糖链精准水解至最内核的GlcNAc。这一步像剥开复杂的糖链外衣，暴露出两个统一的“锚点”。

第二步--叠氮活化

通过β-1,4-半乳糖基转移酶（GalT(Y289L)）和UDP-GalNAz，将含叠氮基团连接到暴露的GlcNAc上，生成叠氮活化的抗体。两个位点，精确无误。

第三步--点击反应

叠氮活化的抗体与携带DBCO（二苯并环辛炔）功能团的payload（MMAE或PNU）通过无铜点击化学（SPAAC） 形成稳定的三唑环连接。所有步骤均在生理条件下进行，有效保持抗体质量。

反应完成后，通过亲和层析去除过量毒素试剂，即可获得高度均一的DAR 2 ADC产物。

整个过程分三天完成：第一天完成去糖基化和叠氮活化（过夜孵育），第二天完成毒素偶联（过夜孵育），第三天完成纯化。

为什么是DAR 2

传统偶联方式的困境

早期ADC的偶联主要依赖赖氨酸或半胱氨酸的非选择性偶联方法，产物是DAR 0、2、4、6甚至8的复杂混合物。这意味着同一批ADC中，有的抗体没有带上药，有的却背负了过多payload--前者稀释药效，后者则可能带来脱靶毒性和药代动力学的不确定性。

DAR 2：疗效与安全性的最佳平衡

DAR 2-4被认为是在药代动力学和体内效力之间实现最佳平衡的范围。DAR过低（如DAR 1）疗效不足，DAR过高则可能带来聚集、清除加快和脱靶毒性等问题。

GlyCLICK技术在每个抗体的Fc段两个糖基化位点上各偶联一个payload，定量生成DAR 2的均一产物。质谱分析证实，采用该技术生成的ADC是单一物质--没有DAR 0、没有DAR 4、没有DAR 6/8副产物。这意味着ADC开发者拿到的是一个“表里如一”的产品：每个分子的结构、载荷量、药代行为都是一致的，批间一致性由此得到根本保障。

免疫反应性完好如初

Fc段定点偶联的巧妙之处在于：修饰位点位于Fc糖基化区域，远离抗体的抗原结合域（Fab区）。因此，偶联后的抗体完整保留了抗原结合能力和稳定性。表面等离子体共振（SPR）分析显示，经该技术标记的抗体完全保持了免疫反应性。

试剂盒组成与保存条件

GlyCLICK ADC试剂盒包含偶联2 mg抗体所需的所有酶、试剂和耗材。各组件需在收货后按以下条件分别保存：

组分名称	数量	保存条件
Desalting Spin column, 0.5 ml, 40K	1支	4°C ~ 8°C
Antibody concentrator（含2支收集管）, 0.5 ml, 50K	1支	4°C ~ 25°C
Desalting Spin column, 2 ml, 40K	1支	4°C ~ 8°C
Immobilized GlycINATOR, microspin column	1支	4°C ~ 8°C
UDP-GalNAz	1管（固体）	4°C ~ 8°C，避光
20× TBS pH 7.4 (0.5 M)	3 × 2 ml	4°C ~ 8°C
Buffer additive	1 × 50 µl	4°C ~ 8°C，避光
β-1,4-galactosyltransferase (Y289L) (GalT)	1 × 40 µl	4°C ~ 8°C，避光
DBCO-modified toxin（MMAE或PNU）	1管（固体）	-25°C ~ -5°C，避光
CaptureSelect Fc, Microspin	2支	4°C ~ 8°C

重要注意事项：

· DBCO- MMAE或PNU操作时请穿戴适当的实验室防护装备

· 请勿冷冻 Desalting Spin Columns、Immobilized GlycINATOR、CaptureSelect™ Columns 及 GalT 酶

· 整个操作流程中必须避免使用叠氮化钠

· 试剂盒仅供研究使用（R&D use only）

订购信息

GlyCLICK® ADC系列试剂盒

货号	产品名称	规格	说明
L1-T01-200	GlyCLICK® ADC kit PNU 2 mg	偶联2 mg IgG	含PNU payload
L1-T02-200	GlyCLICK® ADC kit MMAE 2 mg	偶联2 mg IgG	含MMAE payload

两款试剂盒均包含偶联2 mg IgG所需的全部酶、试剂和耗材。

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货号	产品名称	用途说明
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更多产品请访问我们的网站www.seebio.cn，或致电400-021-8158.

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