DSS小鼠结肠炎模型构建全流程详解
发布时间：2026-07-14 点击数：3
硫酸葡聚糖钠（Dextran Sulfate Sodium，DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎是炎症性肠病（IBD）领域经典体内动物模型。该模型构建主要原理是 DSS 破坏结肠上皮黏膜屏障，促使肠道菌群侵入固有层，激活固有免疫与适应性免疫，诱发结肠局部急性 / 慢性炎症、黏膜糜烂出血、肠组织缩短水肿，高度模拟人类溃疡性结肠炎（UC）腹痛、腹泻、黏液脓血便、肠道慢性损伤与屏障破损核心病理特征。
实验准备（方案仅供参考）
（一）实验动物选型
模型类型 | 推荐品系 | 周龄体重 |
急性结肠炎 | C57BL/6J | 6\8周，18~22g |
基础饲养：SPF级环境，12h明暗循环，常规辐照饲料、无菌饮水，适应性驯养7d，每日更换垫料，剔除体弱、体重偏差过大个体，按体重分层随机分组，单笼标记耳号区分个体。 | ||
（二）试剂与耗材配制
1. DSS母液配制（w/v质量体积比）
无菌水溶解DSS粉末，0.22~0.45μm滤膜过滤除菌，4℃避光冷藏，注：每48h更换新鲜溶液，禁止长期存放；
①轻度急性炎症：1.5%~2%DSS
②中度标准造模：2.5%~3%DSS
③重度急性损伤：4%~5%DSS
单笼参考用量：4~5只小鼠每笼单次配制100mL，单鼠日均饮水约5mL，按需扩增体积。
2. 其他辅助试剂：如粪便隐血检测试纸、4%多聚甲醛固定液、PBS、DAI评分记录表、解剖器械、游标卡尺、电子天平等。
（三）组别设计（每组样本量n≥6只，建议n=8~10只）
1、空白对照组：全程无菌纯水饮用，每日等量溶剂灌胃；
2、DSS模型组：DSS饮水+等量溶剂灌胃；
构建流程
Day0（造模前1d）：全部小鼠称重作为基线、采集粪便、记录基础状态，随机分组编号；
Day1~Day7：模型及给药组自由饮用3%DSS无菌水溶液，空白组正常饮水；每2d彻底更换全新DSS溶液，防止降解污染；
每日固定时间记录：体重降幅、粪便性状、隐血结果，计算DAI疾病活动指数；
Day7终点：腹腔麻醉（戊巴比妥钠）脱颈处死，完整分离结肠组织，沿肠系膜纵向剪开、生理盐水冲洗肠内容物，测量结肠总长度，称重脾脏；结肠分段固定用于病理、分子生物学检测。
观测指标与DAI评分标准
（一）DAI疾病活动指数（总分0~4分，越高炎症越重）
评分 | 体重下降 | 粪便性状 | 便血情况 |
0 | 无下降 | 成型硬便 | 无隐血/肉眼血便 |
1 | 下降1%~5% | 轻度松散便 | 隐血试纸弱阳性 |
2 | 下降6%~10% | 稀软半成型便 | 隐血强阳性 |
3 | 下降11%~15% | 完全腹泻水样便 | 肉眼可见鲜血便 |
4 | ＞15% | 失禁腹泻 | 大量肉眼血便 |
DAI单日得分=三项指标平均分，连续累计统计，模型组DAI稳定＞2判定造模成功。 | |||
（二）标本指标
①结肠长度：空白组正常C57BL/6小鼠结肠约7\8cm，模型组通常缩短1.5\3cm；
②脾脏脏器系数：脾脏湿重/小鼠体重，炎症刺激下脾脏代偿肿大，系数显著升高；
③肠黏膜肉眼观察：充血水肿、糜烂溃疡、肠腔粘连、内容物脓血附着。
（三）组织学或分子检测
1、HE染色病理切片：病理评分依据黏膜缺损深度、炎症细胞浸润范围、隐窝破坏程度来评估全结肠损伤情况。
2、分子水平：结肠组织qPCR/WB检测促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-17；紧密连接蛋白ZO-1、Occludin；炎症小体NLRP3、Caspase-1等指标。
FAQ
1、出现造模成功率低、个体差异大的现象
原因分析：DSS溶液过期未更换、饮水瓶漏水、小鼠品系混杂、饲养环境应激；
解决方案：严格48h换液，选用同批次雄性C57BL/6，饲养环境避光降噪。
2、如果出现小鼠批量死亡
原因分析：多为DSS浓度过高（＞5%）或造模时长超9d，体重骤降超25%需提前终止实验安乐死。
3、给药方式禁忌
严禁以腹腔/尾静脉注射DSS，仅结肠局部接触给药（自由饮水）为标准方式，注射会造成全身毒性且无法靶向肠道造模。
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参考文章
【1】Whittem CG, Williams AD, Williams CS. Murine Colitis modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). J Vis Exp. 2010 Jan 19;(35):1652. doi: 10.3791/1652.
【2】Das S, Batra SK, Rachagani S. Mouse Model of Dextran Sodium Sulfate (DSS)-induced Colitis. Bio Protoc. 2017 Aug 20;7(16):e2515. doi: 10.21769/BioProtoc.2515. PMID: 34541176