高品质重组双碱性内切酶（RKex2）：多肽药物与胰岛素制造的精密催化引擎

RKex2（也称重组双碱性氨基酸内肽酶，Recombinant Kex2 Protease）是一种在生物制药和分子生物学领域广泛使用的关键工具酶。Kex-2（E.C.3.4.21.61）属于枯草杆菌蛋白酶家族，为酵母自身编码的一种前体加工酶，Ca2+ 依赖型丝氨酸蛋白酶，能够专一性地识别和切割Lys-Arg，Arg-Arg，Pro-Arg等双碱性氨基酸的羧基端肽键。不同于Trypsin，该酶不能识别和切割单一碱性氨基酸（Arg或Lys）的羧基端肽键。常在酵母表达外源蛋白前体中加入Kex-2识别位点，便于外源蛋白前体加工。该酶最适pH为9.0，在偏酸性环境中稳定，稳定pH为5.0-6.0。最适温度为37 ℃，酶活性不受常规丝氨酸蛋白酶抑制剂（如PMSF、TPCK等）抑制。

在生物制药与多肽药物研发的赛道上，每一次精准的酶切都是通往成功的关键。西宝生物专为生物制药级应用打造的重组双碱性内切酶（RKex2），以优秀的催化性能与严苛的质控标准，全面助力生物药物研发与规模化生产。

1.助力多肽药物与胰岛素制造：在甘精胰岛素等胰岛素类似物的生产中，有效切除信号肽与连接肽，完美规避B链22位精氨酸错切风险：

2.GLP-1类药物（如司美格鲁肽）串联工艺：作为司美格鲁肽等GLP-1类药物中间体主肽链制备的核心原料，常与羧肽酶B（CPB）搭配使用，实现高效、高产的精准串联切割，大幅提升产物纯度；

3.外源蛋白前体加工：在毕赤酵母表达系统中，设计蛋白序列时引入重组Kex2蛋白酶切位点，使在后期的分泌表达过程中被酵母自身重组Kex2蛋白酶识别而酶切，从而实现重组蛋白的大量表达。

蛋白质研究领域重组双碱性内切酶（RKex2）在酶解和肽图分析、测序中发挥重要作用：

1.重组Kex2蛋白酶用于蛋白质的酶解和肽图分析，帮助研究蛋白质的结构和功能。

2.蛋白质测序：在蛋白质测序过程中，重组Kex2蛋白酶可用于切割蛋白质，生成适合测序的肽段。

碱性氨基酸：水解生成的氢氧根负离子多于氢正离子的氨基酸，其特点是侧链常含有可质子化的碱性化学基团。包括以下三种：

Arg 和 Lys 带有强正电荷的侧链基团，RKex2 的活性中心具有相应的负电荷口袋，能够同时容纳两个碱性氨基酸残基。这种“双重锁定”机制正是 RKex2 具有极高特异性、能有效避免单一碱性氨基酸错切的化学基础。在实际的生物制药工艺中，重组双碱性内切酶（RKex2）巧妙利用Arg和Lys构建酶切位点，同时规避His的干扰，是保障重组蛋白高效、精准加工的关键。

西宝生物重组Kex2蛋白酶氨基酸序列来源于酿酒酵母，通过毕赤酵母重组表达系统制备，经分离纯化得到，适合进行大规模生产，活性更高，纯度更高，宿主蛋白残留少，质量更加稳定。

●　单批次产量大，批间差小，且批间一致性高，满足科研和工业化客户的需求。

●　高纯度，高比活性：产品纯度高达90%以上，酶比活性≥10U/mg，确保产品的高效性和稳定性。

●　无外源性病毒污染，无动物源生产原料：重组生产过程不使用任何动物源原料，避免了外源性病毒污染的风险。

●　配套服务齐全，可提供生产工艺质量控制RKex2蛋白酶微量残留检测ELISA试剂盒。

SDS-PAGE纯度>90%。

溶解缓冲：20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca2+，pH 5.0~5.5；

酶切体系：50~100 mmol/L Tris，2 mmol/L Ca2+，pH 7.0~9.0；或HEPES，5 mmol/L  Ca2+，pH 7.0~9.0；

推荐使用量：蛋白酶：融合蛋白质量比1：20~1：1000

西宝生物的RKex2在生物制药领域具有广泛的应用价值，特别是在重组蛋白和多肽的生产制造中。它被广泛用于胰岛素类似物（如甘精胰岛素）的信号肽和连接肽的切除，能有效避免B链22位精氨酸的错切风险，从而提高产品的纯度和生物活性。

1. 可用于融合标签的切割；

2. 生物制药领域常用Kex2联合CPB用于胰岛素类似物、GLP-1、重组多肽的生产制备，如甘精胰岛素、司美格鲁肽（索玛鲁肽）等。

储存稳定性：冻干粉存于-15 ℃以下，24个月稳定；20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca2+，

储存稳定性：pH 5.0~5.5溶解后分装储存于-15 ℃以下，避免反复冻融；溶解后2~8 ℃保存建议不超过24 h。

运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。

合成多肽序列YGKRLWK,理论酶切位点酶切产物YGKR及LWK，蛋白酶：合成多肽质量比1：1000，37 ℃酶切反应10 min，LC-MS验证酶切反应特异性。

 

羧肽酶B（E.C 3.4.17.2）属金属羧肽酶A和羧肽酶B（CPA/CPB）家族，可选择性水解蛋白或多肽羧基端的Arg和Lys。不同于切割芳香族或脂肪类氨基酸残基的羧肽酶A，羧肽酶B优先切割碱性氨基酸，同时也能切割一些非碱性氨基酸。重组CPB的活性受到典型的金属螯合剂如EDTA，及Cu2+ ，Hg2+ 抑制；而Zn2+ ，Mn2+ 等金属离子则能够不同程度提高酶活。CPB的最适pH为8.0，偏酸或偏碱均会造成活性下降，pH接近5.0时活性接近零，pH>12.0时活性完全丧失。CPB在一定温度内（<60 ℃）活性随温度升高而上升。

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