C肽（C-Peptide）-磁微粒化学发光法（AE/AP） /荧光免疫层析解决方案

   

1. 项目背景    

摘自《C肽测定试剂注册技术审查指导原则（2025年修订版）（征求意见稿）》

1.1项目简介及临床意义    

C肽（C-Peptide）又称连接肽，是胰岛β细胞的分泌产物，它与胰岛素有一个共同的前体─胰岛素原。一个分子的胰岛素原经酶切后，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽。C肽本身无生物活性，由于胰岛素和C肽是以等摩尔浓度分泌的，进入血液后，大部分胰岛素经肝脏被灭活，而C肽被肝脏摄取很少，加上C肽降解速度比胰岛素慢，所以血液中C肽浓度比胰岛素高，一般在5倍以上，故C肽更能准确反映胰岛β细胞的功能。因此测定血液中C肽水平可作为胰岛β细胞分泌功能的重要指标，特别对用外源性胰岛素治疗的糖尿病人更需要测定其C肽，因胰岛素制剂中不含C肽，不影响患者血液中C肽的水平。

C肽水平测定可应用于糖尿病分型及了解糖尿病患者胰岛β细胞的功能。无论1型或2型糖尿病患者，初病时都应通过检测C肽或胰岛素水平以判断胰岛β细胞功能。

   

1.2已上市产品性能指标    

2. 性能表现    

针对C肽（C-Peptide）项目的检测，西宝生物推出4株C肽单抗及1款C肽抗原。    

具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。

2.1化学发光（AE）平台    

组合1：C肽抗体（货号：EKY0706G）包被羧基磁珠+C肽抗体（货号：EKY0706H）标记吖啶酯；    

     

组合2：C肽抗体（货号：EKY0706G）标记生物素+C肽抗体（货号：EKY0706H）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；    

   

线性范围：0.05ng/mL-40ng/mL；最低检出限：0.05ng/mL。HOOK：200ng/mL。

2.2化学发光（AP）平台    

组合3：C肽抗体（货号：EKY0706C）包被羧基磁珠+C肽抗体（货号：EKY0706D）标记碱性磷酸酶；    

     

组合4：C肽抗体（货号：EKY0706C）标记生物素+C肽抗体（货号：EKY0706D）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；    

     

线性范围：0.05ng/mL-40ng/mL；最低检出限：0.05ng/mL。HOOK：200ng/mL。

2.3荧光免疫层析平台    

组合5：C肽抗体（货号：EKY0706D）标记荧光微球+C肽抗体（货号：EKY0706C）划膜；    

     

线性范围：0.05ng/mL-40ng/mL；最低检出限：0.05ng/mL。HOOK：200ng/mL。

2.4各组分稳定性评估    

2.4.1采用C肽磁珠标记物稀释液（货号：DCD0566A）将磁珠包被的C肽抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.2采用C肽吖啶酯标记物稀释液（货号：DCD0566A）将吖啶酯标记的C肽抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.3采用C肽 AP酶标记物稀释液（货号：DCD0535A）将碱性磷酸酶标记的C肽抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.4采用链霉亲和素（SA）稀释液（货号：DCD0566D）将SA磁珠浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.5采用C肽生物素标记物稀释液（货号：DCD0566A）将生物素标记的C肽抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；

2.4.6采用C肽抗原稀释液（货号：DCD0566E）将C肽抗原配制成梯度进行37℃热稳定性实验；

如表1所示：

a.磁珠包被C肽抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明磁珠包被C肽抗体工作液热稳定性良好；

b.吖啶酯标记C肽抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明吖啶酯标记C肽抗体工作液热稳定性良好；

c.碱性磷酸酶标记C肽抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明碱性磷酸酶标记C肽抗体工作液热稳定性良好；

d.SA磁珠单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明SA磁珠的热稳定性良好。

d.C肽生物素单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明C肽生物素热稳定性良好。

e.C肽抗原梯度（液体型）单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%左右，表明C肽抗原（液体型）梯度热稳定性良好。

表1 C肽抗原各组分工作液及标准品热稳定性7天数据    

3.临床相关性    

3.1化学发光（AE）平台：    

3.1.1西宝生物发光（AE）平台皮C肽原料配对组合1与罗氏的C肽试剂（电化学发光法）赋值的临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好；

   

3.1.2西宝生物发光（AE）平台皮C肽原料配对组合2与罗氏的C肽试剂（电化学发光法）赋值的临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好；

   

3.2化学发光（AP）平台：    

3.2.1西宝生物发光（AP）平台皮C肽原料配对组合3与罗氏的C肽试剂（电化学发光法）赋值的临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好；

   

3.2.2西宝生物发光（AP）平台皮C肽原料配对组合4与罗氏的C肽试剂（电化学发光法）赋值的临床样本相关性R²＞0.95，相关性良好；

   

3.3荧光免疫层析平台：    

西宝生物荧光免疫层析平台C肽原料配对组合5与罗氏的C肽试剂（电化学发光法）赋值的临床样本相关性R²＞0.95左右，相关性良好。

   

4. 测试方案    

4.1化学发光（AE）平台    

4.1.1 C肽抗体配对组合1（两试剂模式）    

待测抗原:C肽抗原（货号：EDD0451B）；    

样本:样品加样量50ul；

试剂1：C肽抗体（货号：EKY0706G）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：C肽抗体（货号：EKY0706H）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：50ul样本+50ul试剂1+50ul 试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.2  C肽抗体配对组合2（三试剂模式）    

待测抗原C肽抗原（货号：EDD0451B）；    

样本:样品加样量50ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：C肽抗体（货号：EKY0706G）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：C肽抗体（货号：EKY0706H）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：50ul样本+50ul M试剂+50ul试剂1，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul 试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。    

4.2化学发光（AP）平台    

4.2.1 C肽抗体配对组合3（两试剂模式）    

待测抗原:C肽抗原（货号：EDD0451B）；    

样本:样品加样量20ul；

试剂1：C肽抗体（货号：EKY0706C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：C肽抗体（货号：EKY0706D）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

4.2.2 C肽抗体配对组合4（三试剂模式）    

待测抗原:C肽抗原（货号：EDD0451B）；    

样本:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：C肽抗体（货号：EKY0706C）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：C肽抗体（货号：EKY0706D）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：    

第一步：20ul样本+50ul M试剂+50ul试剂1，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul 试剂2，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。    

4.3荧光免疫层析平台    

C肽抗体配对组合5    

待测抗原:C肽抗原（货号：EDD0451B）；    

反应条件：10ul样品+100ul稀释液混匀，上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。    

5.产品信息