AAV载体全攻略：从细胞感染到动物模型的高效应用指南

作为一种基因递送工具，腺相关病毒（AAV）在基因治疗和基础研究中发挥着重要作用。AAV具备宿主范围广泛、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优势，已广泛应用于多种细胞及动物模型。

提供一系列高品质的AAV产品。产品涵盖多种血清型与报告基因，可满足您在体外细胞感染和体内动物实验中的多样化科研需求。

1. 成熟的无血清悬浮培养体系

可规模化放大的无血清悬浮培养技术，确保病毒产量高、批次间一致性强

2. 多种血清型纯化平台

覆盖常见AAV血清型（如AAV1, 2, 5, 6, 8, 9）

3. 免疫原性低

当AAV用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时,不易造成免疫反应

4. 宿主范围广

AAV可以感染分裂细胞和非分裂细胞

5. 表达稳定

AAV滴度可至5E+13GC/mL,并可在体内长期稳定表达

AAV病毒体积=最佳MOI×细胞数目/病毒滴度

例如，如果目的细胞的最佳MOI=10000，需要感染10⁵的细胞，共计需要10⁹ GC的病毒.如果病毒滴度为1×10¹² GC/mL,那么就需要将1ul的病毒加入培养基中。

易感细胞MOI建议：1000-50000

难感细胞MOI 建议：2000000

强烈建议：使用含GFP或Luciferase的AAV进行预实验，确定最佳MOI。

转导前1天

将靶细胞接种到培养皿中，调整细胞量使转导时融合度为30%-50%。

37°C、5% CO₂培养箱中培养18-20小时。

第1天

轻柔混匀病毒液，与适量培养基混合（建议培养基用量约100 μl/cm²，如6孔板每孔用1 ml）。

移除细胞原有培养基，加入含病毒培养基。

轻摇培养板使分布均匀，37°C、5% CO₂培养过夜（或缩短至6-8小时以减少细胞毒性）。

第2天

移除含病毒培养基，更换为新鲜完全培养基。

继续培养过夜。

第3天及之后

通常在转导后24-48小时，目的基因表达明显，可进行后续分析。

使用表达绿色荧光蛋白的AAV2型腺相关病毒以MOI=10000转导293T细胞。100×参数下拍照。左图：明视野；右图：绿色荧光。

AAV/IE1在HEK293细胞中呈阳性表达。A：原始放大倍数 20×；B：原始放大倍数 63×。

体内动物注射（以小鼠为例）

推荐起始剂量（按体重）：

为了确定用于小鼠或其他小动物注射的AAV最佳量，建议首次测试三种剂量：10¹¹、10¹²和10¹³ GC/kg。

注射5种血清型（1/2/6/8/9）的AAV-eGFP载体至小鼠体内转染心脏

假设您的小鼠是20克，三种剂量是2x10⁹、2x10¹⁰和2x10¹¹ GC/小鼠。如果正在进行非局部注射，您可能还需加入更高的剂量，如4x10¹¹ GC/小鼠。请注意，这些是针对小鼠的通用指南，可能不适用于大型动物模型（如猪、非人灵长类动物）。

运输：全程干冰冷链

长期保存：-80°C（稳定性 ≥1年）

短期保存：-20°C（≤2-3周）或 4°C（融解后，1-2周）

使用前：4°C缓慢融化

分装建议：按单次用量分装，避免反复冻融（虽AAV较稳定，但仍建议最大限度保护活性）

1. Yu Y, et al.Protective CD8+ T-cell responses to cytomegalovirus driven by rAAV/GFP/IE1 loading of dendritic cells. Chiriva-Internati M -Journal of translational medicine(2008)

2. Prasad KM,et al.Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution. French BA -Gene therapy(2010)