雌二醇（E2）- 磁微粒化学发光法（AE/AP）/荧光免疫层析 解决方案（小分子双抗体夹心法）
发布时间：2026-02-05 点击数：0
1.项目背景
1.1临床介绍
1.1.1雌二醇简介
雌二醇（Estradiol，简称E2）是一种类固醇激素，属于雌激素家族中活性最强、生物活性最高的成员。它在人体内的主要来源如下：
女性：主要由卵巢的卵泡、黄体分泌，妊娠期妇女的胎盘也会大量产生。
男性：少量由肾上腺皮质和睾丸间质细胞产生。
1.1.2临床意义
雌二醇检测在临床中具有重要价值，主要用于以下几个方面：
a.评估卵巢功能：通过检测不同阶段的雌二醇水平，结合卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）等指标，可判断卵巢的储备功能、卵泡发育情况及排卵状态。例如，卵泡期雌二醇水平过低可能提示卵巢功能减退。
b.诊断妇科疾病：有助于诊断多囊卵巢综合征、卵巢早衰、闭经、子宫内膜异位症等疾病。如卵巢早衰患者，雌二醇水平通常明显降低，同时FSH升高。
c.监测生育相关问题：在辅助生殖技术（如试管婴儿）中，监测雌二醇水平可指导促排卵治疗，确定取卵时机，评估卵泡质量。
d.孕期管理：妊娠期间，雌二醇水平会显著升高，其变化可反映胎盘功能和胎儿发育情况。异常升高或降低可能与妊娠高血压、先兆流产等风险相关。
e.诊断内分泌紊乱：雌二醇水平异常可能与甲状腺功能异常、肾上腺疾病等内分泌疾病有关，需结合其他检查综合判断。
f.评估更年期症状：绝经后女性雌二醇水平下降，可能出现潮热、出汗、情绪波动、骨质疏松等症状。检测雌二醇可帮助评估更年期状态，指导激素替代治疗。
1.2小分子双抗体夹心法
2024年公开专利CN117871874A《小分子物质免疫检测方法》对小分子夹心法的反应原理做了详细阐述，摘抄部分内容如下。
本发明提出了一种小分子物质免疫检测方法，其特征在于，包括：（1）将含有小分子物质的样本、配体、第二抗体和表面活性剂进行反应，得到小分子物质-配体-第二抗体三元复合物，且所述小分子物质-配体-第二抗体三元复合物中小分子物质诱导配体形成至少一个新的构象表位，所述第二抗体可特异性结合所述至少一个新的构象表位，所述表面活性剂可消除所述第二抗体与构象未改变的配体之间的结合；（2）检测所述小分子物质-配体-第二抗体三元复合物。
样本中的小分子物质与配体发生特异性结合，得到小分子物质-配体复合物，并且小分子物质-配体复合物中小分子物质诱导配体形成至少一个新的构象表位。小分子物质-配体复合物与第二抗体和表面活性剂反应，第二抗体特异性地与形成新构象表位的配体结合，同时也会与构象未改变的配体产生弱结合。表面活性剂可消除第二抗体与构象未改变的配体之间的结合，得到小分子物质-配体-第二抗体三元复合物。通过检测三元复合物，可以实现小分子物质检测。由此，采用双抗体夹心法可以提高检测准确性和灵敏度，不同浓度梯度样本检测区分度高。同时，减少了筛选高特异性复合物抗体的难度，更有利于小分子物质检测试剂盒的大规模生产和检测，应用价值高。
2.性能表现
针对E2的检测，西宝生物推出2株E2抗体（小分子双抗体夹心法）、1款E2标准品及3种解离剂。
具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。
2.1化学发光（AE）平台
组合1：
雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被羧基磁珠+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记吖啶酯+E2解离剂（AE发光专用）（货号：DCH0213A）；
线性范围：5pg/mL-3000pg/mL；最低检出限：5pg/mL；HOOK：100000pg/mL。
2.2化学发光（AP）平台
组合2：
雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被羧基磁珠+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记碱性磷酸酶+E2解离剂（AP发光专用）（货号：DCH0213B）；
线性范围：5pg/mL-3000pg/mL；最低检出限：5pg/mL；HOOK：100000pg/mL。
2.3荧光免疫层析平台
组合3：
雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）标记荧光微球+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）划膜+E2解离剂（层析专用，货号：DCH0213C）（含E2荧光处理剂（层析专用），货号：DCH0214A）；
线性范围：20pg/mL-3000pg/mL；最低检出限：20pg/mL；HOOK：50000pg/mL。
2.4各组分稳定性评估
2.4.1采用E2磁珠稀释液（化学发光）将磁珠包被的E2抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；
2.4.2采用E2磁珠稀释液（化学发光）将吖啶酯标记的E2抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；
2.4.3采用E2碱性磷酸酶稀释液（化学发光）（含蛋白保护剂GH，货号DCL0009A）将碱性磷酸酶标记的E2抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；
2.4.4采用E2标准品稀释液（化学发光）将E2标准品配制成梯度进行37℃热稳定性实验；
如表1所示：
a.磁珠包被E2抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明磁珠包被E2抗体工作液热稳定性良好；
b.吖啶酯标记E2抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±15%以内，表明吖啶酯标记E2抗体工作液热稳定性良好；
c.碱性磷酸酶标记E2抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±15%以内，表明碱性磷酸酶标记E2抗体工作液热稳定性良好；
d.E2标准品梯度单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明E2标准品梯度热稳定性良好。
表1 E2各组分工作液热稳定性7天数据
序号 | E2标准品稀释浓度（pg/mL） | 磁珠-包被E2抗体工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | 吖啶酯标记E2抗体工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | 碱性磷酸酶标记E2抗体工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | E2标准品梯度37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 6.7% | -9.1% | -8.7% | 3.0% |
S1 | 5 | 5.8% | -8.2% | -8.3% | 0.7% |
S2 | 50 | 7.4% | -6.2% | -12.4% | -10.1% |
S3 | 250 | 6.6% | -6.7% | -12.7% | -6.6% |
S4 | 750 | 9.3% | -12.6% | -10.3% | 0.7% |
S5 | 1500 | 3.7% | -13.1% | -8.4% | -3.1% |
S6 | 3000 | 6.0% | -7.5% | -5.8% | -6.4% |
平均变化（不含S0） | 6.5% | -9.1% | -9.7% | -4.1% | |
3.临床相关性
3.1化学发光（AE）平台：
西宝生物发光（AE）平台E2抗体配对组合1与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的低值（＜300pg/mL）临床样本相关性R2＞0.90，相关性较好；与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜3000pg/mL）临床样本相关性R2＞0.95，相关性良好。
3.2化学发光（AP）平台：
西宝生物发光（AP）平台E2抗体配对组合2与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的低值（＜300pg/mL）临床样本相关性R2＞0.90，相关性较好；与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜3000pg/mL）临床样本相关性R2＞0.95，相关性良好。
3.3荧光免疫层析平台：
西宝生物荧光免疫层析平台E2抗体配对组合3与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的低值（＜300pg/mL）临床样本相关性R2＞0.90，相关性较好；与罗氏诊断的E2试剂（电化学发光法）赋值的高值（＜3000pg/mL）临床样本相关性R2＞0.95，相关性良好。
4.测试方案
4.1化学发光（AE）平台
E2抗体配对组合1
待测抗原:E2标准品（货号：DKY0347A）；
样本:样品加样量10ul；
试剂1：雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
试剂3：E2解离剂（AE发光专用）（货号：DCH0213A）。
反应条件：
第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul 试剂2+50ul试剂3，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2化学发光（AP）平台
E2抗体配对组合2：
待测抗原:雌二醇（E2）标准品（货号：DKY0347A）；
样本:样品加样量10ul；
试剂1：雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；
试剂3：E2解离剂（AP发光专用）（货号：DCH0213B）。
反应条件：
第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2+50ul试剂3混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
4.3荧光免疫层析平台
E2抗体配对组合3
待测抗原:E2标准品（货号：DKY0347A）；
反应条件：10ul样品+100ul E2解离剂（层析专用，货号：DCH0213C）（含E2荧光处理剂（层析专用），货号：DCH0214A）混匀（无需等待解离），上样，反应时间（10min-15min）；
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
5.产品信息
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
雌二醇（E2）抗体（E2 antibody) | EKY0342G | E2配对： 雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被羧基磁珠+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记吖啶酯+E2解离剂（发光专用）（货号：DCH0213A）（发光配对组合1） 雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）包被羧基磁珠+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）标记碱性磷酸酶+E2解离剂（发光专用）（货号：DCH0213B）（发光配对组合2） 雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342H）标记荧光微球+雌二醇（E2）抗体（货号：EKY0342G）划膜+E2解离剂（层析专用，货号：DCH0213C）（含E2荧光处理剂（层析专用），货号：DCH0214A）（荧光配对组合3） |
雌二醇（E2）抗体（E2 antibody) | EKY0342H | |
雌二醇（E2）标准品 | DKY0347A | |
雌二醇（E2）（货号：EKY0342H）包被羧基磁珠浓缩液 | DKY1381A | |
雌二醇（E2）（EKY0342G）吖啶酯浓缩液 | DKY1381B | |
雌二醇（E2）（EKY0342G）标记碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1381C | |
雌二醇（E2）（EKY0342H）标记荧光微球浓缩液 | DKY1381D | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
APS-5 发光底物液（即用型） | ECD0532M | |
羧基磁性微球，1um | DEG0852A | |
时间分辨荧光微球，羧基（300nm） | AEG0789E | |
雌二醇（E2）解离剂A（AE发光专用） | DCH0213A | |
雌二醇（E2）解离剂B（AP发光专用） | DCH0213B | |
雌二醇（E2）解离剂C（层析专用） | DCH0213C | |
雌二醇（E2）荧光处理剂（层析专用） | DCH0214A | |
蛋白保护剂GH | DCL0009A | 建议使用浓度为5%-10%。 |