同型半胱氨酸（HCY）-磁微粒化学发光法（AE/AP） +荧光免疫层析解决方案
发布时间：2025-12-30 点击数：0
1.项目背景
摘自《高同型半胱氨酸血症的诊断、治疗与预防专家共识》
1.1病因及分类
同型半胱氨酸是蛋氨酸代谢过程中的中间产物，主要通过甲基化及转硫化两条途径转化代谢，血液同型半胱氨酸水平受参与蛋氨酸代谢过程中的各种酶及辅因子(如钴胺素、维生素B6、叶酸)影响。食物中的叶酸还原为四氢叶酸，在丝氨酸羟甲基转移酶作用下转化为5,10-亚甲基四氢叶酸，并在亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)作用下转化为5-甲基四氢叶酸，提供甲基给同型半胱氨酸，在蛋氨酸合成酶作用下生成蛋氨酸。钴胺素参与5-甲基四氢叶酸的再甲基化反应。蛋氨酸在蛋氨酸腺苷转移酶作用下，被三磷酸腺苷激活形成S-腺苷蛋氨酸，S-腺苷蛋氨酸是体内最重要的甲基供体。在转硫途径中，同型半胱氨酸在胱硫醚β-合成酶作用下转化为胱硫醚，并进一步在胱硫醚γ-裂解酶作用下裂解为半胱氨酸和α-酮丁酸。在同型半胱氨酸再甲基化及转硫通路中，任何一个酶或辅酶缺陷都会导致高同型半胱氨酸血症。
遗传性高同型半胱氨酸血症分为酶缺陷和辅酶缺陷两大类，酶缺陷以胱硫醚β-合成酶、亚甲基四氢叶酸还原酶、蛋氨酸腺苷转移酶缺陷最为常见，辅酶缺陷以钴胺素和叶酸代谢障碍最为常见。一些非遗传性因素也可导致高同型半胱氨酸血症，如营养不良、长期素食导致的营养素缺乏(如叶酸、维生素B6、钴胺素、甜菜碱缺乏)、衰老、慢性胃肠疾病、肝病、肾病、恶性肿瘤、药物(如异烟肼、甲氨蝶呤)以及不良生活方式(如长期吸烟、酗酒等)。
1.2 诊断与鉴别诊断
不同病因导致的高同型半胱氨酸血症患者体内生化代谢异常有所差异，需通过病史调查、血液及尿液代谢分析、维生素测定、基因分析等检查鉴别诊断。
(1)病史调查：一般资料、症状、体征，调查个人史、饮食习惯、用药史、家族史。对于哺乳期婴儿，需调查母亲的饮食与营养状况及疾病史，以鉴别母亲营养不良导致的婴儿继发性高同型半胱氨酸血症。
(2)血浆或血清总同型半胱氨酸：血液中大部分同型半胱氨酸与蛋白质结合，少数与同型半胱氨酸自身或半胱氨酸结合形成混合型同型半胱氨酸二硫化物，推荐检测总同型半胱氨酸浓度作为确诊高同型半胱氨酸血症的关键方法。
1.3参考范围
目前临床实验室常用的血清中Hcy的正常参考范围为5~15μｍol/Ｌ，但不同的共识或指南也有不同的建议。2020年发布的《高同型半胱氨酸血症诊疗专家共识》中建议，将成人高血同(血同>10μmol/L)划分为轻度(10~15μmol/L)中度(15~30μmol/L)和重度(>30μmol/L)。孕妇和儿童属于特殊人群,宜低于成人参考值。但2022年发布《高同型半胱氨酸血症的诊断、治疗与预防专家共识》根据血清总同型半胱氨酸的浓度不同，分为轻度(15~30μmol/L)、中度(30~100μmol/L)和重度(>100μmol/L)。《中国高血压防治指南（2018年修订版）》中高同型半胱氨酸血症的定义是Hcy大于等于15μmol/L，但2024版本中删除了该表述。
2. 性能表现
针对HCY的检测，西宝生物推出4株抗体及1款标准品及1款SAHH酶。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。
2.1化学发光（AE）平台
组合1：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被羧基磁珠+S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记吖啶酯；
2.2化学发光（AP）平台
组合3：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被羧基磁珠+S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记碱性磷酸酶；
2.3荧光免疫层析平台
组合5：S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：DKY0169D）标记荧光微球+S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196C）划膜；
2.4稳定性评估
2.4.1 各组分工作液稳定性
采用SAH磁珠稀释液（化学发光）将磁珠包被的SAH-BSA浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；
采用SAH磁珠稀释液（化学发光）将吖啶酯标记的SAH抗体浓缩液配制成工作液进行37℃热稳定性实验；
采用SAH标准品稀释液（化学发光）将SAH标准品配制成梯度进行37℃热稳定性实验；
如表1所示：
a.磁珠包被SAH-BSA工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明磁珠包被SAH-BSA工作液热稳定性良好；
b.吖啶酯标记SAH抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明吖啶酯标记SAH抗体工作液热稳定性良好；
c.SAH标准品梯度单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明SAH标准品梯度热稳定性良好。
表1 SAH各组分工作液热稳定性7天数据
序号 | SAH标准品稀释浓度（μmol/L） | 磁珠-包被SAH-BSA工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | 吖啶酯标记SAH抗体工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | SAH标准品梯度37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | -2.5% | 0.1% | 0.4% |
S1 | 1.3 | -5.6% | -2.4% | 1.4% |
S2 | 2.6 | -2.0% | 6.8% | 3.1% |
S3 | 13 | 0.4% | 3.1% | 5.2% |
S4 | 26 | -5.1% | 6.6% | 2.2% |
S5 | 52 | -5.4% | 4.2% | 4.0% |
平均变化 | -3.3% | 3.1% | 2.7% | |
3.临床相关性
3.1化学发光（AE）平台：
西宝生物发光（AE）平台SAH原料配对组合1与HCY试剂（酶循环法）赋值的临床样本相关性R<sup>2</sup>＞0.90，相关性良好；
3.2化学发光（AP）平台：
西宝生物发光（AP）平台SAH原料配对组合2与HCY试剂（酶循环法）赋值的临床样本相关性R<sup>2</sup>＞0.90左右，相关性良好；
3.3荧光免疫层析平台：
西宝生物荧光平台SAH原料配对组合3与HCY试剂（酶循环法）赋值的临床样本相关性R<sup>2</sup>＞0.90左右，相关性良好。
4. 测试方案
4.1化学发光（AE）平台
SAH原料配对组合1
待测抗原:SAH标准品（货号：EAS0196F）
样本:样品加样量20ul；
试剂1：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样本+20ul处理液1（含DTT（货号：DCH0005D）+腺苷（货号：ACI0010A）混合，37℃孵育5min；
第二步：加入20ul处理液2（含S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶（SAHH）（货号：ECE1043C）混合，37℃孵育5min；
第三步：加入50ul试剂1+50ul 试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第四步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2化学发光（AP）平台
SAH原料配对组合2
待测抗原:SAH标准品（货号：EAS0196F）
样本:样品加样量20ul；
试剂1：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样本+20ul处理液1（含DTT（货号：DCH0005D）+腺苷（货号：ACI0010A）混合，37℃孵育5min；
第二步：加入20ul处理液2（含S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶（SAHH）（货号：ECE1043C）混合，37℃孵育5min；
第三步：加入50ul试剂1+50ul 试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第四步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
4.3荧光免疫层析平台
抗体配对组合3：S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：DKY0169D）标记荧光微球+S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196C）划膜
待测抗原:SAH标准品（货号：EAS0196F）
反应条件：
50ul样品+200ul处理液3（含DTT（货号：DCH0005D）+腺苷（货号：ACI0010A）+S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶（SAHH）（货号：ECE1043C）混合上样，反应时间（10min-15min）；
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
5.产品信息
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗 | EKY0169E | SAH配对：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被羧基磁珠+S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记吖啶酯（发光配对组合1） SAH配对：S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196E）包被羧基磁珠+S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：EKY0169E）标记碱性磷酸酶（发光配对组合2） |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原 | EAS0196E | |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗 | DKY0169D | SAH配对：S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）单抗（货号：DKY0169D）标记荧光微球+S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原（货号：EAS0196C）划膜（荧光免疫层析平台配对组合3） |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH-BSA)抗原 | EAS0196C | |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH）标准品 | EAS0196F | 质控 |
SAH-BSA抗原（货号：EAS0196E）包被羧基磁珠浓缩液 | DKY1380A | |
SAH抗体（货号：DKY0169D）标记荧光微球浓缩液 | DKY1380B | |
SAH抗体（货号：EKY0169E）吖啶酯浓缩液 | DKY1380C | |
SAH抗体（货号：EKY0169E）标记碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1380D | |
APS-5发光底物液（即用型） | ECD0532M | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
羧基磁性微球，1.2um | DEG0800D | |
链霉亲和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
重组碱性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
时间分辨荧光微球，羧基（300nm） | AEG0789E | |
SAH磁珠稀释液（化学发光） | \ | |
SAH吖啶酯稀释液（化学发光） | \ | |
SAH标准品稀释液（化学发光） | \ | |
Adenosine（腺苷） | ACI0010A | |
DTT（二硫苏糖醇） | DCH0005D | |
S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶（SAHH） | ECE1043C |