细胞蛋白提取工具酶速查手册
发布时间：2025-09-26 点击数：6
工具酶是细胞蛋白提取实验中的"分子手术刀"，通过精准切割特定化学键来执行复杂任务。其核心职能贯穿提取全过程：首先是高效裂解，通过水解细胞壁或细胞膜的特殊组分；其次添加蛋白酶抑制剂等，迅速中和内源性蛋白酶活性，为核心目标蛋白的完整性和生物活性提供保护；最后是清除杂质，尤其是降解大量释放的基因组DNA和RNA，解决样品粘稠难题。
工具酶的选择与配伍应用，是决定最终提取产物的得率、纯度与功能性三大关键指标的基础。
细胞蛋白提取流程
根据功能特性与作用目标，常用的工具酶可分为三大类别：
细胞裂解辅助类酶（如重组胰蛋白酶、蛋白酶K），通过降解细胞壁或细胞膜结构，促进胞内蛋白释放；
蛋白降解抑制类酶（如蛋白酶抑制剂混合物、磷酸酶抑制剂），有效阻断内源性蛋白酶及磷酸酶对目标蛋白的降解或修饰；
核酸杂质清除类酶（如DNase I、RNase A），选择性水解核酸，减少提取过程中基因组DNA或RNA对蛋白样品的干扰，提升蛋白纯度。
西宝生物科技在细胞蛋白提取领域，凭借其深厚的酶学技术与创新理念，致力于为科研及产业人员提供高效、稳定、可靠的整体解决方案。拥有先进的酶分子改造与蛋白质表达平台，关键工具酶实现自主研发与生产，从源头确保产品活性、纯度与批间一致性，为您提供稳定可靠的质量保障。不仅是试剂供应商，更是您的技术合作伙伴。西宝提供覆盖从细胞预处理到核酸去除的全流程一体化解决方案。
1. 细胞培养相关酶
产品名称 | 货号 | 主要用途 |
重组胰蛋白酶 | DCE0060R | 细胞培养、蛋白质酶解；替代动物源性胰蛋白酶 |
RNase A | ECE0201A | 清除实验环境 RNA 污染；质粒 DNA 制备中去除 RNA |
蛋白酶 K | EBY0027N | 核酸提取（灭活核酸酶）、去除组蛋白；耐 SDS 和 EDTA |
重组胰蛋白酶（Recombinant Trypsin）
温和高效的细胞消化酶，替代动物源胰蛋白酶，减少细胞损伤和污染风险。用于：
原代细胞或干细胞培养的传代。
组织解离（如脂肪间充质干细胞分离）。
无血清培养体系（xenofree 条件）。
步骤
浓度：0.05%-0.25%（如 0.1% 常用）。
温度与时间：37°C 孵育 3-5 分钟，显微镜下观察细胞变圆后终止。
终止方法：加入含血清的培养基或胰蛋白酶抑制剂。
RNase A 在 RNA 提取中的应用
核糖核酸酶，特异性降解 RNA，用于：
DNA 提取中去除 RNA 污染。
RNA 蛋白复合物（如 CLIP 实验）中释放 RNA。
组织或细胞样本中 RNA 的彻底清除。
步骤
浓度：20-100 μg/mL（如 50 μg/mL 常用）。
温度与时间：37°C 孵育 15-30 分钟。
蛋白酶 K（Proteinase K）
强力广谱蛋白酶，可消化多种蛋白质，常用于去除样本中的蛋白污染（如 DNA/RNA 提取中），
以及组织或细胞裂解液中蛋白质的降解。
步骤
浓度：通常使用 50-100 μg/mL 工作浓度。
温度与时间：56°C 孵育 1-2 小时（或根据实验需求调整）。
终止反应：65°C 加热 10-20 分钟或加入 EDTA 终止。
2. 蛋白提取与纯化酶
产品 | 货号 | 类型 / 用途 | 特点 |
蛋白酶抑制剂混合物（广谱型） | 通用型，抑制丝氨酸 / 半胱氨酸 / 金属蛋白酶等 | 含 Aprotinin、Bestatin 等，质谱兼容，防止蛋白降解 | |
磷酸酶抑制剂混合物 | 抑制碱性磷酸酶、PP1/PP2A 等 | 含斑蝥素、微囊藻毒素，维持磷酸化状态 | |
溶菌酶 | ECE0057F | 水解细菌细胞壁（革兰氏阳性菌） | 鸡蛋清提取，用于细菌裂解 |
全能核酸酶 | ECE1160A | 降解 DNA/RNA，去除核酸污染 | 适配高盐环境 |
蛋白酶抑制剂混合物（广谱型）
抑制多种蛋白酶活性，防止蛋白质在提取过程中被降解
准备：将蛋白酶抑制剂混合物从-20°C取出，置于冰上融化
添加：按1:100比例添加到细胞裂解缓冲液中（如1ml裂解液加10μl抑制剂混合物）
混匀：轻轻颠倒混匀，避免产生气泡
立即使用：配制后立即用于细胞裂解，不宜长时间放置
磷酸酶抑制剂混合物
准备：将磷酸酶抑制剂混合物从-20°C取出，置于冰上
添加：按1:100比例添加到预冷的细胞裂解缓冲液中
混匀：轻轻涡旋混匀
预冷：将含有抑制剂的裂解液预冷至4°C
溶菌酶
裂解细菌细胞壁，释放细胞内含物。
工作浓度：0.1-1mg/ml（根据细菌种类调整）
步骤
准备：将溶菌酶储存液在冰上融化
添加：按需要浓度添加到细菌悬液中
孵育：37°C孵育30-60分钟，或4°C过夜
观察：观察菌液是否变清，表明细胞壁已裂解
全能核酸酶
降解所有类型的核酸（DNA和RNA），减少核酸污染。
工作浓度：5-50U/ml
步骤
准备：将全能核酸酶储存液在冰上融化
添加：按需要浓度添加到样品中
孵育：37°C孵育15-30分钟
终止：65°C孵育10分钟终止反应。
3. 蛋白修饰酶
产品名称 | 货号 | 类型 / 用途 | 特点 |
凝血酶 | ECE0616E | 切割 His/GST 标签 | 特异性识别 PR/K 序列，37℃切割 |
肠激酶 | ECE1123A | 切除融合蛋白标签Asp-Asp-Asp-Asp-Lys | 高特异性，4-45℃适用 |
SUMO蛋白酶 | EAE0087A | 切除 SUMO 标签x-Gly-Gly-x | 识别 SUMO 三级结构，4-30℃适用 |
重组 TEV 蛋白酶 | EBY3644A | 切除融合蛋白上7氨基酸序列 EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸 / 丝氨酸之间 | 较 EK、SUMO 等蛋白酶的位点专一性更强，具有高活性和高特异性 |
凝血酶（Thrombin）
作用机制：凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，能够特异性识别并切割精氨酸-甘氨酸肽键（Arg-Gly），常用于蛋白纯化过程中的标签去除。
步骤
缓冲条件：通常在生理pH（7.4-8.0）下进行，含Ca2⁺或Mg2⁺离子
温度：37°C
反应时间：根据底物浓度和酶活性，通常为1-4小时
终止方法：加入蛋白酶抑制剂或加热至95°C
肠激酶（Enterokinase）
作用机制：肠激酶轻链能够特异性识别并切割Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列，产生天然N-末端
步骤
酶浓度：通常使用0.5-1 U/μg融合蛋白
尿素浓度：0-3M（可提高切割效率）
反应缓冲液：20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 2mM CaCl₂, pH 7.5
反应温度：25-37°C
反应时间：过夜（16-18小时）
纯化步骤：切割后可通过Ni-NTA亲和层析去除His标签
SUMO 蛋白酶（SUMO Protease）
作用机制：SUMO蛋白酶（如Ulp1）特异性识别SUMO蛋白与目标蛋白之间的连接肽键，切割后产生天然N-末端
步骤
缓冲液：50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH 8.0
温度：4°C或室温
酶用量：通常为1:50至1:100（酶:底物摩尔比）
反应时间：2-16小时
优势：切割后无额外氨基酸残留，保持蛋白质天然状态
重组TEV蛋白酶（rTEV Protease）
作用机制：TEV蛋白酶特异性识别并切割Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly序列，产生天然N-末端
步骤
缓冲液：50mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, pH 8.0
温度：4°C或室温
酶用量：通常为1:20至1:50（酶:底物摩尔比）
反应时间：2-16小时
应用：广泛用于融合蛋白的标签去除，具有高特异性和温和的切割条件
4 糖基化分析工具酶
糖苷酶 | 名称 | 货号 | 酶切位点 | 特点 |
唾液酸修饰 | 唾液酸酶 (a2-3,6,8) | DCE0457E-10KU | 糖蛋白和寡聚糖上通过 a2-3、a2-6、a2-8 键连接的唾液酸 | 可同时作用于 N-羟乙酰神经氨酸和 N-乙酰神经氨酸 |
唾液酸修饰 | 唾液酸酶 (a2-3,6,8,9) | DCE0457E-10KU | 糖蛋白和寡聚糖上通过 a2-3、a2-6、a2-8 和 a2-9 键连接的唾液酸 | 可同时作用于 N-羟乙酰神经氨酸和 N-乙酰神经氨酸；可忍受 0.5%-1.0% 的去污剂 |
N-糖基化修饰 | PNGase F | ECE0441C | 天冬酰胺和最内侧的 GlcNAc（N-乙酰葡糖胺）之间的糖苷键 | 适用于抗体和糖蛋白的 N-糖基完全去除；可在变性与非变性条件下切割糖蛋白 |
N-糖基化修饰 | 重组 Endo H | DCE0447C | N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构 | 适用于抗体或其它糖蛋白的 N-连接高甘露糖的完全去除；存储液中不含甘油 |
O-糖基化修饰 | O 糖蛋白酶 | 粘蛋白型 O-连接糖（无论是否唾液酸化）的丝氨酸或苏氨酸残基 | 适用于 O-糖基化分析；无需唾液酸酶预先处理 |
5. 蛋白检测酶
产品名称 | 货号 | 类型 / 用途 | 特点 |
辣根过氧化物酶（HRP） | ECE0066R | WB（免疫印迹）/ELISA（酶联免疫吸附实验）检测 | 催化TMB 显色，分子量 44kDa |
碱性磷酸酶 | DCE0108L | WB / 去磷酸化 | 需 Zn2⁺/Mg2⁺激活，用于 DNA 去磷酸化 |
β-半乳糖苷酶 | 报告基因内参 | 催化 ONPG 生成黄色产物，420nm 波长下检测 | |
赖氨酰内切酶 | EXK0369C | 质谱级蛋白消化 | 特异性切割赖氨酸羧基端 |
6. 相关产品
产品名称 | 规格 |
盐酸胍 | ACH0011F |
二硫苏糖醇（DTT） | DDCH0005O |
碘乙酸 | |
三羟甲基氨基甲烷（结晶）(Tris base) | ACC0030B |
三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 (TRIS-HCl) | ACC0029A |