人偏肺病毒（hMPV）抗原检测-免疫层析 （胶体金、彩色乳胶及荧光免疫层析）解决方案

1.项目背景    

摘自《人偏肺病毒感染诊疗方案（2023年版）》    

人偏肺病毒感染是人体感染人偏肺病毒（humanmetapneumovirus，hMPV）后引起的一种急性呼吸道传染病，全年散发，多发生于冬末及春初。hMPV感染大多表现为轻度自限性疾病，部分患者因出现毛细支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重和支气管哮喘急性发作等并发症需要住院治疗，免疫功能低下者可进展为重症肺炎，出现急性呼吸窘迫综合征（ARDS）或多器官功能不全等，甚至导致死亡。

1.1 病原学    

hMPV属于肺炎病毒科，偏肺病毒属，为有包膜的单股负链RNA病毒，平均直径大约200nm。hMPV包括A和B两个基因型，可分为A1、A2、B1、B2四个亚型，这些亚型常常同时流行，各亚型病毒传播力和致病性未见明显差别。

hMPV对热敏感，60℃ 30分钟可灭活；对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感；1%次氯酸钠等含氯消毒剂、5%福尔马林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒剂可灭活病毒；对0.1%脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠（SDS）和曲拉通X-100（TritonX-100）等去污剂敏感。

1.2 临床表现    

潜伏期3-9天，多为3-6天。

多表现为上呼吸道感染症状，如发热、咳嗽、鼻塞、流涕、声音嘶哑等，约1周左右症状逐渐缓解。病情严重者可出现毛细支气管炎、重症肺炎和ARDS，COPD患者感染后病情可加重，支气管哮喘患者可诱发急性发作。严重下呼吸道感染多见于幼儿、老年人等人群。肺移植、造血干细胞移植等免疫功能低下人群感染后症状更重，病死率也相对较高。

1.3 实验室及影像学检查    

a.病毒核酸检测：采集呼吸道标本（鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液等）采用荧光定量PCR、病毒基因测序等方法检测hMPV核酸。核酸检测的敏感性和特异性高。

b.病毒抗原检测：酶免疫法、胶体金法和免疫荧光法等方法检测呼吸道标本中hMPV抗原，但病毒抗原检测阴性不能除外诊断。

c.病毒培养分离：从呼吸道标本培养分离hMPV。

d.血清学检测：检测血清中特异性IgM抗体和IgG抗体，IgM抗体检测敏感性和特异性较低。

2.测试方案及性能表现    

针对人偏肺病毒（hMPV）抗原的检测，西宝生物推出2种单克隆抗体和1种抗原，适合胶体金免疫层析、彩色乳胶免疫层析及荧光免疫层析平台。具体性能如下。

（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。    

2.1 胶体金免疫层析平台    

2.1.1 抗体配对组合1：人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936D）标记胶体金+人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936C）划膜；    

2.1.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（货号：EDD0812A）用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。

2.1.3 反应模式：80uL样品直接上样，反应时间15min-20min；

2.1.4 实验结果：在胶体金免疫层析平台，采用此抗体配对组合1测试HMPV M抗原稀释梯度均显色，灵敏度可达0.05ng/mL。该实验结果表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试抗原梯度示意图

2.1.5 特异性：分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，结果均为阴性，表明特异性良好。

胶体金层析平台测试特异性示意图

2.2 彩色乳胶免疫层析平台    

2.2.1 抗体配对组合2：人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936D）标记彩色乳胶+人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936C）划膜；

2.2.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（货号：EDD0812A）用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。

2.2.3 反应模式：80uL样品直接上样，反应时间15min-20min；

2.2.4 实验结果：在彩色乳胶免疫层析平台，采用此抗体配对组合2测试HMPV M抗原稀释梯度均显色，灵敏度可达0.01ng/mL。表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试抗原示意图

2.2.5 特异性：分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，结果均为阴性，表明特异性良好。

彩色乳胶层析平台测试特异性示意图

2.3 荧光免疫层析平台    

2.3.1抗体配对组合3：人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936D）标记荧光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗体（货号：FKY0936C）划膜；

2.3.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（货号：EDD0812A）用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。

2.3.3 反应模式：80uL样品直接上样，反应时间15min-20min；

2.3.4 实验结果：在荧光免疫层析平台，采用此抗体配对组合3测试HMPV M抗原稀释梯度灵敏度可达0.01ng/mL（如表实验数据所示）。表明此抗体配对在荧光免疫层析平台测试性能良好。此外，测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，结果均为阴性，表明特异性良好。

表1  hMPV抗体配对组合测试数据

测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。    

3.产品信息