重组蛋白纯化检测用 PA标签系统
发布时间：2025-04-09 点击数：13
重组蛋白纯化检测用PA标签系统
◆特点
● 通过树脂再生，降低运行成本
● 超高亲和性抗体，实现高回收率、高纯度纯化
● 在动物细胞表达系（HEK293T细胞、CHO细胞等）中，有效纯化蛋白
● PA标签系统是使用可识别肽标签（12个氨基酸残基）的单抗（NZ-1）。日本开发的亲和性纯化标签系统。
● NZ-1单抗对PA tag具有高亲和性和特异性，可应用于Western Blotting、细胞流式分析、免疫组化（ICC）。
通过免疫沉淀，可纯化PA标签融合蛋白以及树脂再生。
● PA标签系统，可一步纯化高纯度PA标签融合蛋白。
◆PA标签系统
Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).
Fujii, Y. et al.
新型亲和标签系统“PA tag”的应用方法~蛋白的纯化及检测~
蛋白科学学会档案, 7, e075 (2014)
◆PA标签表达载体案例
载体 | 表达模式 | 宿主细胞 | MCS启动子 |
pCAG | 瞬时表达 | 灵长类（人、猴）、犬细胞等粘着细胞 和啮齿动物细胞 | CAG |
测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息，已附在产品现货说明书中。
另外可点击和光主页/TARGET标签，查看序列信息、Multi Cloning Site(MCS)信息。
◆用PA标签从培养上清中亲和提纯的案例
数据提供：大阪大学 蛋白研究所附属蛋白分析先进研究中心
分子创制学研究室 高木淳一老师，藤井勇树老师
◆Protocol目的蛋白的纯化
１．哺乳类动物细胞转染(HEK293T)
转染处于40-60%融合状态的细胞
培养基：D-MEM, 5%FBS
２．回收培养上清和吸附蛋白树脂
转染48-72小时后，回收约420 mL培养上清，加入8 mL抗PA标签抗体琼脂糖珠，混合2小时（2-10℃）
３．树脂回收
用50 mL的纯化柱。回收步骤2)中的琼脂糖珠
４．树脂洗涤
加入珠4倍量的TBS 缓冲液（20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl），清洗5次
５．PA标签肽从树脂中竞争性洗脱
加入经1×TBS溶液, pH 7.5溶解过的PA 标签肽（终浓度0.1 mg/mL），体积量需为珠的一倍，
然后分10次回收PA标签融合蛋白X
６．SDS-PAGE
样品量
c. sup：5 μL, flow through：5 μL, wash：5 μL,
肽洗脱（1-10）：各10 μL
可纯化PA标签融合蛋白X且不依赖PA标签。→可实现极高纯度的亲和纯化。
◆通过PA tag降低背景的方法
 可在含有高浓度NaCl的TBS溶液中，通过前清洗去除杂质蛋白！！ | M: Marker I: input 100ng分 P: 纯化前样品 1: wash片段① 2: wash片段② 3: wash片段③ 4: wash片段④ 5: wash片段⑤ 6: wash片段⑥ 7: wash片段⑦ 8: wash片段⑧ 9: wash片段⑨ 10: 酸洗脱① 11: 酸洗脱② 12: 酸洗脱③ 13: 酸洗脱④ 14: 酸洗脱⑤ |
在20 mL的昆虫细胞溶解液中加入蛋白Z，使其浓度变为1.0 mg/L后，添加200 μL抗PA标签抗体琼脂糖珠，4℃温度条件下，搅拌3小时。
分别用不同浓度的TBS溶液（0.15 M、0.5 M、1.0 M NaCl）进行调整，用琼脂糖珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl(pH 2.7)，室温条件下平稳震动5 min。
离心后回收上清，用1 M Tris-HCl (pH 9.0)做中和处理。
SDS-PAGE后进行银染，比较去除污染蛋白之后，不同浓度下的结果。
◆使用案例：Western Blotting
 数据提供：东北大学研究生院医学系研究科 地域革新领域 加藤 幸成老师，金子 美华老师 NZ-1显示出与天然抗体具有相同的高检测灵敏度。 | Lane 1 一抗：抗IDH1抗体（RcMab-1）, 1 μg/mL 二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 Lane 2 一抗：抗PA tag抗体, 1 μg/mL 二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 Lane 3 一抗：抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5 μg/mL 二次抗体：抗小鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 样品量：各10 μg 曝光时间：10分钟 |
◆PA标签系列
产品名称 | 子类克隆号 | 适用实验 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
单抗 | |||||
抗PA标签, 大鼠单抗 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody | 大鼠IgG2a NZ-1 | IP, WB, FCM, ICC | 免疫化学用 | 016-25861 | 200 μL |
012-25863 | 1 mL | ||||
HRP标签单抗 | |||||
抗PA标签, 大鼠单抗,过氧化酶结合 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated | 大鼠IgG2a NZ-1 | WB | 免疫化学用 | 015-25951 | 200 μL |
011-25953 | 1 mL | ||||
产品名称 | 子类克隆号 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
抗体结合琼脂糖珠 | ||||
抗PA标签抗体琼脂糖珠 Anti PA tag Antibody Beads | 大鼠IgG2a NZ-1 | 免疫化学用 | 012-25841 | 2 mL(Net 1 mL) |
018-25843 | 10 mL (Net 5 mL) | |||
016-25844 | 50 mL (Net 25 mL) | |||
识别N端、C端的PA标签 使用载体：4% 琼脂糖 溶液组成：1 x PBS (pH7.2), 0.05 w/v%叠氮化钠 抗体结合量：参见标签记载 结合容量：1 mL本品可结合约0.015-1.0 mg的PA标签融合蛋白 | ||||
抗体结合磁珠 | ||||
MagCaptureTM HP 抗PA标签抗体磁珠 MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads | 大鼠IgG2a NZ-1 | 免疫化学用 | 137-18751 | 2 mL |
溶液组成：1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05 w/v% sodium azide | ||||
产品名称 | 备注 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
肽 | ||||
PA标签肽 PA tag Peptide | 含量（HPLC）95%以上 | 基因研究用 | 167-25501 | 5 mg |
163-25503 | 25 mg | |||
清洗溶液 | ||||
PA标签清洗溶液 PA tag Washing Solution | 已过滤消毒 即用型 | 基因研究用 | 169-27261 | 50 mL |
产品名称 | 可选Marker | 产品编号 | 包装 | |
大肠杆菌 | 动物细胞 | |||
瞬时载体 | ||||
pCAG-Ble PA 标签-C pCAG-Ble PA tag-C | Bleomycin | 161-26861 | 20 μg | |
pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus | Bleomycin | 168-26871 | 20 μg | |
pCAG-Bsd PA 标签-C pCAG-Bsd PA tag-C | Blasticidin S | 165-26881 | 20 μg | |
pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus | Blasticidin S | 162-26891 | 20 μg | |
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Hyg PA tag-C | Hygromycin B | 165-26901 | 20 μg | |
pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus | Hygromycin B | 162-26911 | 20 μg | |
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Neo PA tag-C | Kanamycin | G418 | 169-26921 | 20 μg |
pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus | Kanamycin | G418 | 166-26931 | 20 μg |
◆相关产品
内参照
下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。
产品名称 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
抗β肌动蛋白单抗 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody | 免疫化学用 | 013-24553 | 200 μg |
011-24554 | 1 mg | ||
017-24556 | 5 mg | ||
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated | 免疫化学用 | 017-24573 | 200 μL |
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody | 免疫化学用 | 011-25034 | 10 μg |
017-25031 | 200 μg | ||
013-25033 | 1 mg | ||
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody 抗β-微管蛋白, 单抗 | 免疫化学用 | 018-25044 | 10 μg |
014-25041 | 200 μg | ||
010-25043 | 1 mg | ||
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody 抗GAPDH, 单抗 | 免疫化学用 | 016-25523 | 200 μg |
014-25524 | 1 mg | ||
010-25526 | 5 mg | ||
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated 抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合 | 免疫化学用 | 015-25473 | 200 μL |
蛋白酶抑制剂系列
产品名称 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized | 通用型 | 165-26021 | 1 mL用 |
161-26023 | 1 mL用×5 | ||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution (EDTA free) (×100) | 动物细胞 | 163-26061 | 1 mL |
169-26063 | 1 mL×5 | ||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized | 2D电泳 | 162-26031 | 1 mL |
168-26033 | 1 mL×5 | ||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100) | 植物细胞 | 164-26091 | 1 mL |
160-26093 | 1 mL×5 | ||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (×100) | His Tag 纯化※ | 167-26101 | 1 mL |
163-26103 | 1 mL×5 |
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