胃泌素17（G-17）-磁微粒化学发光法（AE/AP） /荧光免疫层析解决方案（含保护剂评估）
发布时间：2024-11-11 点击数：15
1.项目背景
胃泌素（Gastrin）是一种主要由胃窦和十二指肠的Ｇ细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34，其中80%~90%是由17个氨基酸残基所组成的G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标。以G-17作为核心指标的人体血清胃功能检测，属于一项无创、无痛且安全、经济的人体胃病检测方法。这种检测项目可以有效地减少胃癌患病风险，大幅度地提高胃癌疾病的早诊以及早治概率，对于各种胃病的预防和治疗都具有重要的积极意义。
《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2014年）》：联合检测血清G-17、PG I、PG I/PGII比值及Hp抗体，以增加评估胃黏膜萎缩范围及程度的准确性。
《中国慢性胃炎共识意见2017年》明确血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17的检测有助于判断有无胃黏膜萎缩及其程度。
《中国早期胃癌筛查指南》（2017年）：胃功能三项检查结合内镜精查可以提高对胃癌的诊断率。
《慢性胃炎基层诊疗指南（实践版2019）》进一步明确血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17检测有助于慢性萎缩性胃炎的诊断。PGI、PGI/PGII比值降低，血清G-17水平升高，提示胃体萎缩为主；若PGI及PGI/PGII比值正常，血清G-17水平降低，提示胃窦萎缩为主；全胃萎缩者，PG及G-17均降低。
2. 性能表现
针对胃泌素17（G-17）的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体和1种抗原，适合化学发光（AE/AP）和荧光层析平台。具体性能如下
（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。
2.1化学发光（AE）平台：
组合1（两试剂模式）：
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯；
线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
组合2（三试剂模式）：
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记生物素+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；
线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2化学发光（AP）平台：
组合3（两试剂模式）：
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶；
线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.3荧光免疫层析平台：
组合4：
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）划膜；
线性范围：0.5pmol/L-100pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
组合5：
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）划膜；
线性范围：0.5pmol/L-100pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.4 稳定性评估
2.4.1 吖啶酯标记抗体及磁珠包被抗体稳定性
采用胃泌素17（G-17） AE发光稀释液（货号：DCD0523A）将胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠浓缩液、胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯浓缩液稀释成磁珠工作液及吖啶酯工作液，进行37℃热稳定性实验。如表1所示：
a. G-17吖啶酯工作液、磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内，表明G-17吖啶酯工作液及磁珠工作液热稳定性良好；
b. G-17吖啶酯工作液+磁珠工作液联合37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化也在±5%以内，表明G-17试剂热稳定性良好。
表1 G-17磁珠及吖啶酯工作液稳定性7天数据
序号 | G-17抗原稀释浓度pmol/L | G-17 吖啶酯工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | G-17 磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 | G-17 吖啶酯工作液+磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 4.9% | -5.9% | 6.2% |
S1 | 0.5 | 6.0% | -5.0% | 1.8% |
S2 | 1 | 0.2% | -0.1% | -5.0% |
S3 | 5 | -0.3% | 2.5% | 5.5% |
S4 | 25 | 4.7% | -1.4% | 5.6% |
S5 | 100 | 5.6% | 1.9% | 5.6% |
S6 | 500 | 4.5% | 2.1% | 1.6% |
S7 | 1000 | 3.9% | 0.4% | 0.5% |
平均变化
| 3.7%
| -0.7%
| 2.7%
| |
2.4.2 碱性磷酸酶标记抗体稳定性
A）胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）稀释到合适浓度后，进行37℃热稳定性实验。如表1所示，G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上，表明G-17 ALP酶工作液热稳定性差。
表2 G-17 ALP酶工作液热稳定性3天数据（不含保护剂）
序号 | G-17抗原稀释浓度pmol/L | G-17 ALP酶工作液37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异 |
S0 | 0 | -10.8% |
S1 | 0.5 | -31.1% |
S2 | 1 | -41.1% |
S3 | 5 | -38.2% |
S4 | 25 | -33.3% |
S5 | 100 | -34.7% |
S6 | 500 | -25.8% |
S7 | 1000 | -27.0% |
平均变化
| -30.3%
| |
B）在AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，继续进行胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示，G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在±5%左右，表明G-17 ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）对G-17 ALP酶工作液的稳定性有很大帮助。
表3 G-17 ALP酶工作液热稳定性7天数据（含保护剂）
序号 | G-17抗原稀释浓度pmol/L | G-17 ALP酶工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 1.8% |
S1 | 0.5 | -4.3% |
S2 | 1 | -1.5% |
S3 | 5 | -3.8% |
S4 | 25 | -6.1% |
S5 | 100 | -2.3% |
S6 | 500 | -3.0% |
S7 | 1000 | -3.0% |
平均变化
| -2.8%
| |
2.4.3 G-17抗原稳定性
采用G-17抗原稀释液（货号：DCD0522A）将G-17抗原（货号：EDD0791A）稀释成7个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表4所示：
c. G-17抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存7天与-20℃储存7天发光值平均降幅在5%以内，表明G-17抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存稳定性良好；
d. G-17抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值平均降幅超5%以内，表明G-17抗原稀释梯度（液体型）热稳定性良好。
表4 G-17抗原稀释梯度（液体型）稳定性7天数据
序号 | G-17抗原稀释浓度pmol/L | G-17 抗原稀释梯度（液体型）2-8℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异 | G-17 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 3.3% | 6.0% |
S1 | 0.5 | 3.5% | -8.3% |
S2 | 1 | -3.4% | 0.4% |
S3 | 5 | 1.3% | -7.1% |
S4 | 25 | 0.7% | -9.4% |
S5 | 100 | 0.2% | -2.7% |
S6 | 500 | 2.0% | 1.4% |
S7 | 1000 | -3.1% | 0.5% |
平均变化
| 0.6%
| -2.4%
| |
3.临床相关性
3.1化学发光（AE）平台：
西宝生物发光（AE）平台G-17抗体配对组合1（两试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；
西宝生物发光（AE）平台G-17抗体配对组合2（三试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好。
3.2化学发光（AP）平台：
西宝生物发光（AP）平台G-17抗体配对组合3（两试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；
3.3荧光免疫层析平台：
西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合4与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；
西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合5与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；
4. 测试方案
4.1化学发光（AE）平台
4.1.1抗体配对组合1（两试剂模式）：
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）
样本/校准品:样品加样量20ul；
试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
4.1.2抗体配对组合2（三试剂模式）：
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）
样本/校准品:样品加样量20ul；
M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；
试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育5min，清洗；
第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2 化学发光（AP）平台
抗体配对组合3（两试剂模式）：
待测抗原：胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）
样本/校准品:样品加样量20ul；
试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
4.3 荧光免疫层析平台抗体配对组合4及组合5：
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）
反应条件：
样品+稀释液混匀（本次按照1:2稀释），上样，反应时间（10min-15min）；
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
5.产品信息
产品名称
| 货号
| 推荐配对
|
AE发光稀释液 | DCD0523A | / |
AP酶标记物稀释液 | DCD0519A | / |
蛋白保护剂GH | DCL0009A | 推荐使用浓度20%左右 |
胃泌素17（G-17）抗原稀释液 | DCD0522A | / |
胃泌素17（G-17）抗体 | EKY0901B | 胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯（配对组合1）
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记生物素+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）（配对组合2）
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶（配对组合3）
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）划膜（配对组合4）
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）划膜（配对组合5）
|
胃泌素17（G-17）抗体 | EKY0902B | |
胃泌素17（G-17）抗体 | EKY0901C | |
胃泌素17（G-17）抗体 | EKY0902C | |
胃泌素17(G-17)重组抗原 | EDD0791A | |
胃泌素17（G-17）抗体 （货号：EKY0901B）包被羧基磁珠浓缩液 | DKY1336A | |
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记生物素浓缩液 | DKY1336B | |
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯浓缩液 | DKY1336C | |
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1336D | |
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）标记荧光微球浓缩液 | DKY1336E | |
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）标记荧光微球浓缩液 | DKY1336F | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517A | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
链霉亲和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
时间分辨荧光微球，羧基（200nm） | AEG0786B |