反相色谱中增强离子样品的保留剂-离子对试剂

在液相色谱分析中，当处理电离能力较强的样品时,为了确保目标峰的保留效果更佳，需添加特定的离子对试剂，以使分析物中的离子结合，形成能在柱上保留的分子。离子对试剂种类较多,今天小编带大家了解一下离子对试剂的类型。

在流动相中添加离子对试剂R+或R-后，这些试剂会在色谱柱的固定相上被保留。随后，溶质进入色谱柱并与离子对试剂发生离子交换，这改变了化合物的保留特性。通常情况下，若流动相中加入的是阴离子型试剂，电离的碱性化合物的保留时间会增长；而中性化合物由于色谱柱固定相表面被离子对试剂吸附，部分孔隙被堵塞，导致中性化合物的保留时间缩短；酸性化合物由于与固定相中的离子对试剂相互排斥，以及固定相部分被离子对试剂堵塞，其保留时间也会减少。相反，当流动相中加入阳离子型试剂时，电离的酸性化合物的保留时间会增长，而中性和碱性化合物的保留时间则会减少。

l 被分析化合物是离子型样品。

l 当改变反向色谱法的其他条件被分析的化合物仍无法得到一个很好的保留，或者更换各种条件无法得到一个较好的分离度时。

离子对试剂的种类及其浓度对分离效果具有显著影响。选择离子对试剂的种类时，需考虑样品的特性。若样品为强酸或强碱，离子对试剂可选用强酸、强碱、弱碱或弱酸。若样品为弱酸或弱碱，则离子对试剂应为强碱或强酸。对于结构差异较大的混合样品，离子对试剂的选择无特定要求。通过调整离子对试剂和有机溶剂的浓度，可以实现理想的分离效果。

四丁基氢氧化铵（10%水溶液） 、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵。

戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠 、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠。

高氯酸钠、三氟乙酸、七氟丁酸等

通常情况下，试剂的疏水性越强，化合物与之结合后在色谱柱上的保留时间就越长。以酸性化合物为例，若要达到相同的保留时间，使用含有16个碳原子的TBA+时，其浓度可以比含有8个碳原子的TEA+低。

在流动相中加入离子对试剂后，若提升酸性化合物的pH值，会增加其离子化程度，从而增强与离子对试剂的相互作用，导致保留时间延长。这与未添加离子对试剂时提高pH值导致酸性化合物保留时间缩短的情况相反。而对于碱性化合物，提高pH值会增加其分子状态，减少与离子对试剂的结合，从而减弱保留时间。

与RPC相比，离子对色谱法对温度控制的要求更为严格，需要高度的温度重现性。温度的微小变化可能会导致化合物相对保留时间的显著变化，进而影响分离效果。

调整B%的比例对化合物保留时间的影响与RPC分离样品时相似，但IPC有其独特之处。例如，增加B%的比例（在使用磺酸盐作为离子对试剂的流动相中），所有化合物的保留时间都会缩短，尤其是碱性化合物的保留时间减少更为明显。

由于色谱柱部分被离子对试剂覆盖，其对化合物保留的实际影响通常被掩盖。因此，通过改变色谱柱来控制分离并非首选方法，效果也不会特别显著。