全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体
发布时间：2024-10-21 点击数：31
全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体
Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）
本产品为两种针对SOD1突变体的抗体混合物。SOD1突变体被认为是导致神经性疾病肌萎缩性侧索硬化(ALS)的原因之一，本产品可特异性识别SOD1突变体的共通二级结构，并且通过免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以检测出上百种SOD1突变体。
另外，本混合型抗体也适用于缺锌性内质网应激相关的SOD1研究。详细请浏览“MEMO--锌缺乏和SOD1立体结构变化”。
※ 本产品仅供研究。研究以外不可使用。
※ 本产品基于东京大学 药学系研究科 细胞情报学教室的研究成果产品化而成。
免疫沉淀后突变体SOD1的检测实例
在HEK293细胞中表达野生型以及不同突变型SOD1，裂解细胞后添加各抗体（MS785：5 μg/mL, MS27：2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反应10小时，然后使用Protein G 磁珠进行免疫沉淀。结果显示，MS785和MS27在经过免疫沉淀反应后，未识别出野生型（WT）但与突变体特异性结合。在抗原位点出现突变时，MS785和MS27无法单独识别，但是补充MS785/MS27混合体后，即可检测出来。
◆肌萎缩性侧索硬化（ALS）与SOD1
肌萎缩性侧索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一种由于运动神经的细胞死亡导致全身骨骼肌无力、主要症状为肌肉萎缩的神经退行性疾病。90%的ALS为非遗传性发病，10%左右为遗传性发病，并且已经鉴定出了约20种致病基因。其中因氧化还原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突变导致发病的案例最多，而表达SOD1突变体的转基因小鼠也作为ALS的动物模型使用。借助各种研究手段我们有望阐明由SOD1突变导致的ALS发病机理。
SOD1是一种在活性中心带有铜离子与锌离子的金属酶，主要负责分解细胞内产生的活性氧。虽然SOD1是一种相对较小的蛋白，只有154个氨基酸（人）、分子量仅为24 kDa，但是却有着上百种突变体（图1）。这些突变体基本不会影响分解天然活性氧的酶活性。因此，研究认为，ALS的发病中存在着酶活性以外的其他因素，而伴随突变的毒性获得（toxic gain of function）被视为极有可能的因素。
原本，野生型SOD1形成二聚体，但有关SOD1突变体，东京大学一条秀宪教授等人已澄清了的以下要点：
● 上百种各形各式的SOD1突变体采用了与野生型SOD1不同的共通二级结构（图2）。
● 通过与内质网中的蛋白降解途径（ERAD）的构成蛋白Derlin-1相结合获得细胞毒性。
并且，以SOD1突变体与Derilin-1结合位点为基础，成功开发出能够特异性识别突变体立体结构的大鼠单克隆抗体，克隆MS785和MS27。这些抗体作为阐明SOD1突变引发的ALS发病机制的优秀工具备受期待。
图1 报告中SOD1突变位点的案例
图2 SOD1野生型与突变体的结构区别以及抗体识别位点
◆特点
● 混合了抗SOD1大鼠单克隆抗体克隆MS785和克隆MS27的混合型抗体。
※ 亦可分别购入克隆MS785、MS27。
● 克隆MS785和MS27识别SOD1突变体共通的单体二级结构，且拥有在免疫沉淀后检测出上百种SOD1突变体的实绩。
● 可以通过免疫细胞染色法特异性检测SOD1突变体。
● 在缺锌条件下可以检测作为内质网应激的原因之一的野生型SOD1二级结构变化。适用于内质网应激研究和SOD1基础研究。详细请浏览“MEMO--锌缺乏和SOD1二级结构改变”。
◆抗体信息
|
克隆名
|
MS785
|
MS27
|
|
抗体种类
|
大鼠单克隆抗体
|
|
|
同种型
|
IgG2b/κ
|
IgG2a/κ
|
|
交叉性
|
人
|
|
|
性状
|
Protein G纯化（0.5 mg/mL），storage buffer：50％甘油／PBS
|
|
■ 关于克隆MS785与MS27的区别
● MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分别作为抗原制备的单抗。
● 均可广泛地检测突变体，但无法检测到某些每个表位均有突变的特定突变体。
● 由于MS785和MS27有互补性，所以混合型抗体可以补全抗原位点突变体的检测。
◆应用
● 免疫沉淀，免疫染色：突变体检测
● ELISA：突变体检测（详细请参考原著文献2。）
● Western blot：同时检测突变体与野生型
注意：在变性状态下，不仅会检测到SOD1突变体，也会检测到野生型SOD1。因此，实验过程中必须防止蛋白变性，请勿使用SDS等变性剂。
◆原著文献
1. Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012). "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."
2. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015). "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."
◆通过免疫染色对SOD1突变体的检测实例
在HEK293细胞表达野生型以及G93A突变体SOD1（FLAG融合蛋白），分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗体（红）和抗FLAG抗体（绿）进行免疫染色（工作浓度：1 μg/mL）。可以确认，野生型以及G93A突变体均倍倍抗FLAG抗体检测到信号，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗体均不与野生型反应，仅与突变体反应。
◆缺锌状态下野生型SOD1的检测实例
本抗体可检测出缺锌时野生型SOD1的动态结构变化。不仅ALS研究，也适用于SOD1的基础研究。
● 本产品有在血清缺乏条件以及锌螯合剂TPEN处理下检测出内源性野生型SOD1的检测实例。
● MS785、MS27以及混合物都可用于检测。
锌缺乏和SOD1立体构造改变
OD1是拥有锌离子的金属蛋白。东京大学的一条教授等人明确，在缺锌状态下野生型SOD1会释放锌离子，改变二级结构，并采取SOD1突变体相似的单体结构。这种结构变化，令原本不结合的内质网相关性降解（ERAD）蛋白Derlin-1获得结合能力，诱导了ER 应激（内质网应激）。即使是野生型SOD1，本产品也能识别出缺锌状态下的立体结构变化，检测出缺乏锌的SOD1。因此适用于SOD1基础研究以及ER应激研究。
参考文献：
1. Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012). "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."
2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013). "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."
3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015). "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."
将HEK293细胞用10 μM锌螯合剂TPEN处理8小时。细胞裂解后，分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗体进行免疫沉淀。由于锌离子的缺失，内源性野生型SOD1与SOD1突变体同样被MS785、MS27检测出来。
◆储存温度
20°C
◆产品列表
|
产品编号
|
产品名称
|
包装
|
|
FDV-0021A
|
Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail, Human, Rat-Mono(MS785/MS27)
Anti-SOD1（ALS相关突变体）混合型，人，大鼠单克隆（MS785/MS27）
|
100 μg
|
|
FDV-0021B
|
Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS785)
Anti-SOD1（ALS相关突变体）,人，大鼠单克隆（MS785）
|
100 μg
|
|
FDV-0021C
|
Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS27)
Anti-SOD1（ALS相关突变体）,人，大鼠单克隆（MS27）
|
100 μg
|
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。